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课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段
【课题目标】
本课题通过尝试PCR（DNA多聚酶链式反应）技术的基本操作，使学生体验PCR这一常
规的分子生物学实验方法，理解PCR的原理，讨论PCR的应用。
【课题重点与难点】
课题重点：PCR的原理和PCR的基本操作。
课题难点：PCR的原理。
[导学诱思]
1．PCR原理
填写下列表格
参与的组分在DNA复制中的作用
解旋酶
DNA母链
合成子链的原料
DNA聚合酶
引物
DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为，而磷酸基团的末
端称为。DNA聚合酶不能开始合成DNA，而只能，因此，
DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是。
在DNA的复制过程中，复制的前提是。在体外可通
过控制来实现。在的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分
开，这个过程称为。PCR利用了DNA的原理，通过控制温度来控
制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来的DNA
聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。
PCR反应需要在一定的缓冲溶液中提供：，，
，，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复
进行。
2．PCR的反应过程
PCR一般要经历循环，每次循环可以分为、和三步。
从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由延伸而成
的DNA单链会与结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能
，使这段固定长度的序列成指数扩增。
3．实验操作
在实验室中，做PCR通常使用，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微
量移液器，按PCR反应体系的配方在中依次加入各组分，，再参照下表的设置
设计好PCR仪的循环程序即可。
4．操作提示
为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的、、以
及蒸馏水等在使用前必须进行。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在
储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加
反应成分时，移液管上的枪头要。
[疑难点拨]
1.PCR技术简介
PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时
内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以
对样品进行分析研究的问题，被广泛的应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因
克隆和DNA序列测定等各方面。
2．细胞内参与DNA复制的各种组成成分及其作用
①解旋酶：打开DNA双链②DNA母链：提供DNA复制的模板③4种脱氧核苷酸：合
成子链的原料④DNA聚合酶：催化合成DNA子链⑤引物：使DNA聚合酶能够
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