化学农药环境安全评价试验准则 第15部分：蚯蚓急性毒性试验 征求意见稿.docx

GB/T31270.15—XXXX

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化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件规定了化学农药蚯蚓急性毒性试验的试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理、质量控制以及试验报告等的基本要求。

本文件适用于为化学农药登记而进行的蚯蚓急性毒性试验，不适用于易挥发的农药。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T52土壤水分测定法

NY/T1121.2土壤检测第2部分：土壤pH的测定

NY/T4195.8农药登记环境影响试验生物试材培养第8部分：赤子爱胜蚓

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

生殖带clitellum

蚯蚓身体前端表皮上的一种腺体，为鞍状或环带状，通常可通过颜色与蚯蚓身体其他部分区分开。

3.2

成蚓adultworm

身体前端呈现出生殖带的蚯蚓。

3.3

半致死浓度medianlethalconcentration

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在急性毒性试验中，引起50%受试蚯蚓死亡时的被试物浓度，用LC50表示。注：单位为毫克每千克（干土）（mg/kg干土）。

3.4

参比物referencesubstances

在测试中为证实或否定被试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物。

4原理

将蚯蚓置于不同浓度被试物的人工土壤中，每个处理放入10条蚯蚓，在适宜条件下培养两周。观察记录第7d和第14d的中毒症状和死亡数，求出被试物对蚯蚓的LC50值及其95％置信区间。

5试验条件

试验期间温度为20℃土2℃,光照强度400lx~800lx。

6试剂或材料

6.1试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

6.1.1丙酮（C3H6O,CAS号：67-64-1）、正己烷（C6H14,CAS号：110-54-3）等。

6.1.2石英砂（O2Si,CAS号：14808-60-7）。

6.1.3高岭土（Al2Si2O5(OH)4,CAS号：1332-58-7）。

6.1.4碳酸钙（CaCO3,CAS号：471-34-1）。

6.1.5氯乙酰胺（C2H4ClNO,CAS号：79-07-2）。

6.1.6泥炭藓。6.2供试生物

宜选用赤子爱胜蚓（Eiseniafoetida），以二月龄以上、性成熟，体重在300mg~600mg的健康成蚓开展试验。赤子爱胜蚓的培养按NY/T4195.8的要求。

6.3供试土壤

试验基质为人工土壤，配制方法见附录A。

7仪器设备

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7.1结晶皿或烧杯，容量约1L，配备玻璃盖或具孔塑料薄膜。

7.2生态箱或恒温室等培养装置。

7.3搅拌设备或混合装置。

7,4天平（感量0.001g、0.0001g）。

7.5电子秤（感量0.1g）。

7.6温湿度计。

7.7pH计。

7.8烘箱。

7.9照度计等。

8样品

8.1被试物

被试物应使用农药原（母）药、制剂或纯品。试验开始前，应了解被试物的以下信息：

a)水中溶解度；

b)有机溶剂中的溶解度；

c)蒸气压；

d)纯度；

e)在水和土壤中的稳定性；

f)光稳定性

g)正辛醇/水分配系数；

h)快速生物降解试验结果。

8.2参比物

参比物为分析纯氯乙酰胺。

9试验步骤9.1预试验

以较大间距设置若干处理组，按正式试验条件开展预试验，确定正式试验浓度范围。9.2正式试验

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9.2.1浓度设置

在预试验确定的浓度范围内按一定级差设置5个~7个处理组，并设空白对照组，如使用助溶剂还应增设溶剂对照组，每组4个重复。

9.2.2受试生物的准备

供试蚯蚓在试验前置于人工土壤环境中饲养24h，饲养条件与正式试验条件一致。在使用之前将蚯蚓冲洗干净，并用滤纸吸干，称重。

9.2.3被