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酵母RNA的提取及含量测定

实验报告RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在

实验三酵母RNA的提取及含量测定酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析

一、实验目的与要求出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的

1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，

2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作

法，制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%

3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经

二、实验原理离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵

由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上

各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。

法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为

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0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液

核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶的pH和离子强度发生变化。RNA溶液（pH=7.0）的

碱基具有共轭双健系统（-C=C一C=C-），能够强烈吸收ε（ρ）=7700-7800，RNA的含磷

250-280nm波长的紫外光。核酸（DNA,RNA）的最大紫外

吸收值在260nm处。遵照Lambert-Beer定律，可以从实验报告

紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。量为9.5%，含1μg/mLRNA溶液的光密度为

在不同pH溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不0.022-0.024。因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液

同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该

消光系数也随之不同。所以，在测定核酸物质时均应在法简

固定的pH溶液中进行。单、快速、灵敏度高，如核酸3μg/mL的含量即可测

核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）出。对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的

来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm波长核酸样品，测定误差较小。

处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。核酸的摩尔消蛋白质由于含有芳香族氨基酸，因此也能吸收紫外光。

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通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm波长

处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中四、实验步骤

的蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。1、称5g干酵母粉悬浮于30mL0.04MNaOH溶液中，

并在研钵中研磨均匀。

三、主要仪器和试剂2、悬浮液转入三角烧瓶，沸水浴加热30min，冷却，

啤酒酵母粉