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DEAE52纤维素综述

DEAE--52纤维素的处理

1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中约3小时左右。去除杂质最好抽干一下。

2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干。

3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干即可用了。

对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。再生处理可先用高浓度NaCl(1

－2mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。然后，再用0.5mol/L的HCl和NaOH处

理，处理方法与预处理完全相同。

DEAE－纤维素的处理及装柱

（1）处理

本实验采用的是DEAE－纤维素DE52是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡

于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并

将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至

中性。

（2）装柱

将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有

适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，

停止装柱。层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。

（3）平衡

在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，

使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析

柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，

层析柱达到了平衡。在本实验中，用0.002MTris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001MEDTA)，预先将DE-52柱进行平衡。

DEAE—纤维素的活化

称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱

床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。抽干，改用

0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH至8左右（用pH试纸检查）。

再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L，pH6.7

磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。

DEAE—纤维素的再生

用过的离子交换剂可以反复使用，使其恢复原状的方法俗称“再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理，通常只要

“转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子，如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH4OH

浸泡，如希望阴离子交换剂带上Cl—则用NaCl溶液处理。本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后，用0.0175mol/L，

pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型，以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂

蛋白，所以再生时，先用0.5ml/LNaOH浸洗，用去离子水洗至pH8左右，再转型，即可再使用。

人工培养冬虫夏草胞外多糖的分离纯化

采用DEAE-52纤维素(Cl-)离子交换和SephadexG-100葡聚糖凝胶柱层析对乙醇沉淀得到的冬虫夏草胞外多糖进行分

离、纯化，得到EPS-1A级分。经紫外光谱、比旋光度和凝胶渗透色谱分析表明胞外多糖分EPS-1A为相对均一组分，

中性糖含量为99.0%，重均相对分子质量为4.0×104，为非淀粉类，不含单糖、蛋白质、核酸和多酚类物质的水

溶性多糖。

毛竹竹叶多糖分离与纯化

从洗脱曲线还可看出，以水洗脱的曲线拖尾比较严重，选用0.1mol/LNaCI溶液进行洗脱可以减少拖尾。因为葡聚

糖凝胶系弱酸性物质，每克葡聚糖凝胶干胶中含10～20μg当量的羧基基团，该基团能与分离物中的电荷基团发

生非特异性吸附作用，加入一定浓度的缓冲盐可以抑制凝胶的这种吸附作用，同时可减少洗脱峰的拖尾现象。

湿法装柱步骤：

第一，塞棉。取一小块棉花铺平，弄成和层析柱直径一样的圆形，放入层析柱底部，用一