SNT 3729.10-2013 出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第10部分香蕉成分检测 实时荧光PCR法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T3729.10—2013

出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法

第10部分：香蕉成分检测实时荧光PCR法

Identificationoffruitspeciesinexportfoodanddrink—

Part10:DetectionofbananaingredientReal-timePCRmethod

2013-11-06发布2014-06-01实施

中

中华人民共和国

发布

I

SN/T3729.10-2013

前言

SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为以下10个部分：—第1部分：草莓成分检测PCR法；

—第2部分：杏成分检测实时荧光PCR法；

—第3部分：梨成分检测实时荧光PCR法；

—第4部分：芒果成分检测实时荧光PCR法；—第5部分：木瓜成分检测实时荧光PCR法；——第6部分：苹果成分检测实时荧光PCR法；—第7部分：葡萄成分检测PCR法；

—第8部分：山楂成分检测实时荧光PCR法；—第9部分：桃成分检测实时荧光PCR法；

—第10部分：香蕉成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3729的第10部分。

本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、叶军、于翠、李富威、刘月明、陈颖、吴亚君、韩建勋。

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SN/T3729.10—2013

出口食品及饮料中常见

水果品种的鉴定方法

第10部分：香蕉成分检测

实时荧光PCR法

1范围

SN/T3729的本部分规定了出口食品和钦料(油、酒精等精加工食品除外)中香蕉成分的实时荧光

PCR检测方法。

本部分适用于果汁、果酱及其他以水果为原辅料的食品中香蕉成分的定性检测。本部分所规定方

法的最低检出限(LOD)为1%(质量分数)

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

3.1

香蕉Musaparadisaca

芭蕉科芭蕉属植物。

3.2

清汁clarifiedjuice

经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果汁。

3.3

浊汁cloudyjuice

未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)

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SN/T3729.10—2013

dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)。

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammoniumbromide)。

Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]。EDTA;乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)。

Taq:水生栖热菌(Thermusaquaticu)。

OD:光密度值(opticaldensity)。

5方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用香蕉的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，进行食品及饮料中香蕉成分的检测鉴定，其中以香蕉果肉DNA为阳性对照，以非香蕉来源的DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。

6试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均

用无DNA酶污染的容器分装。

6.1检测用引物和探针：见表1。

表1引物探针序列

引物/探针

引物/探针序列(5→3)

目的基因

内参照5端引物

内参照3’端引物

内参照探针

CCTGAGAAACGGCTACCAT

CGTGTCAGGATTGGGTAAT

FAM-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-TAMRA

真核生物18SrRNA基因

香蕉5端引物

香蕉3端引物

香蕉探针

TCGTCCCCTATTG