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明胶微生物限度检查法方法学验证

1样品：

明胶，批号20110114规格：药用辅料；生产厂家：****

胶业有限公司。

2验证用菌种

枯草杆菌CMCC63202-4a；

金黄色葡萄球菌CMCC26003-28；

大肠埃希菌CMCC44102-22；

白色念珠菌CMCC(F)98001；

黑曲霉CMCC(F)98003。

3培养基

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、真菌琼脂培养基、改良马丁培养基、胆盐

乳糖培养基（BL）、营养肉汤培养基、真菌培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基和

甘露醇氯化钠琼脂培养基均由中国药品生物制品检定所生产，按使用说明书配制。

4设备

序号设备型号备注

数显恒温水浴锅HH-6国华电器有限公司

电子天平FA2004上海良平仪器仪表有限公司

雷磁pH计PHS-3C上海精密科学仪器有限公司

上海一恒科技有限公司

电热恒温培养箱DHP-9052

上海一恒科学仪器有限公司

电热鼓风干燥箱101-3上海阳光实验仪器有限公司

隔水式恒温培养箱GHP-9160上海一恒科技有限公司

上海一恒科学仪器有限公司

不锈钢立式电热蒸汽YM50

上海三申医疗器械有限公司

消毒器

净化工作台

吴江市绿叶空调净化有限公司

生物显微镜XSP-00江西枫林光学仪器有限公司

1

5方法

参照中国药典2010年版有关微生物限度检查法方法学验证试验。

6操作方法

6.1常规法——细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证

6.1.1菌液制备

分别接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培

养基中，经30~35℃培养18~24小时后，分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆

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菌的肉汤培养物1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10~10，细菌数约为

50~100cfu/ml，做活菌计数备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，经23~28℃培养24~48小时

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后，取白色念珠菌液体培养物1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10~10，

菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，经23~28℃培养5~7天后，

取黑曲霉斜面培养物，加3~5ml0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，吸出孢子悬液1ml

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+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10，菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。

6.1.2供试液制备

取供试品10g，加pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液至100m