使用酶联免疫分析检测基本信息、测定用途、结果解释注意事项等要点总结.pdfVIP

使用酶联免疫分析检测基本信息、测定用

途、结果解释注意事项等要点总结

使用酶联免疫分析检测蛋白质是诊断工具之一，测试用于监控和

疾病监测以及诊断工具。

检测基本信息

ELISA检测旨在检测针对细菌或病毒的抗原或抗体。抗原是刺激

抗体产生的外来蛋白质。ELISA直接靶向细菌或病毒的蛋白质称为抗

原ELISA，目标动物对细菌或病毒抗体反应称为抗体ELISA。

通过ELISA检测抗体或抗原的概念和过程完全相同，它从获得目

标蛋白开始。对单个蛋白质，需要单独方法来获得该单个蛋白质纯化

浓度，确定目标蛋白是科学而复杂过程。

步骤1：用目标抗原或抗体预涂微孔板。

步骤2：添加样品测试并孵育，以使抗原和抗体之间发生附着。

步骤3：移除样品，并添加附着在抗体相对侧的特定抗体。然后

孵育样品以确保附着，并洗涤以确保去除任何非附着抗体或抗原。

步骤4：添加用能发出荧光的检测器标记的抗体，并将其附着在

步骤3中添加的特殊抗体上。然后再次孵育样品以确保附着，并洗涤

以确保去除任何未附着的标记抗体。

步骤5：添加将触发残留的标记抗体荧光的试剂，然后进行孵育

以确保附着。

步骤6：读取样品，通常使用特定波长的专用机器来量化颜色变

化。这一过程在检测方法是直接、间接还是夹心ELISA方面有一些细

微的差异，每种检测方法都有不同的优点和缺点，但最终结果相同；

吸光度或颜色变化越高，测试样品中目标抗原或抗体预期浓度越高。

直接ELISA：

1.将样品加入微孔

2.蛋白质附着于塑料上

3.偶联检测抗体与固ELISA定化分析物结合

4.酶促显色反应与结合抗体成正比

夹心ELISA：

1.用捕获抗体预涂微孔

2.添加样品，分析物与捕获抗体结合

3.偶联检测抗体与固定化分析物结合

4.间接检测，酶促反应与分析物成正比

竞争ELISA：

1.用第二捕获抗体预涂微孔

2.同时加入捕获抗体、偶联物和样品

3.偶联物和样品结合

4.酶促显色反应与结合偶联物成正比

在竞争ELISA的情况下，关键是所使用的过程实际上会产生相反

的结果。将样品和已知量的标记抗原或抗体添加到待评估的样品中，

以便将它们添加到标记孔中，原始样品和添加的标记蛋白竞争附着在

预涂孔上。当洗涤样品时，任何未附着的标记蛋白将通过洗涤去除。

当样品中目标蛋白的浓度高时导致低吸光度，高值表示低浓度或阴性

结果，无法量化阳性样品抗原/抗体浓度。

合并用于测试的样本

ELISA测定是浓度依赖性的，不要合并进行检测，合并可显著增

加丢失阳性样本的可能性。

ELISA测定用途：

检测是否存在针对目标病原体抗体–抗体ELISA–最常见用途；

确定病原体暴露；

确定动物的疫苗接种状态；

确定感染时间（抗体水平的变化）随时间的变化；

通过检测目标病原体的蛋白质/抗原来检测目标病原体存在–

抗原ELISA。

ELISA结果解释注意事项

1、暴露于病原体的猪需要一段时间才能产生足够抗体，以通过

ELISA检测。

2、2、抗体ELISA检测是无法区分母源抗体与暴露于病原体而产

生的抗体。

3、抗体ELISA检测通常无法区分疫苗产生抗体和野生型暴露产

生的抗体。

4、在少数情况下，可以开发特殊的ELISA检测，以区分感染动

物和接种动物。

5、抗体ELISA结果并不意味着保护，保护可能来自不同的抗体，

这些抗体无法通过检测或细胞介导免疫进行测量，细胞介导免疫与体

液或抗体介导的免疫力完全不同，并且不能通过ELISA进行测量。

6、与PCR相比，抗原ELISA在检测抗原的灵敏度方面明显较低。

PCR检测可有效复制存在DNA/RNA，可检测极低水平病毒或细菌。另

一方面，抗原ELISA需要显著更高浓度病毒或细菌产生足够颜色变化

以使其能够被检测到。

7、当使用商品ELISA试剂盒时，结果是标准化的，并且在实验

室之间是一致的。

8、并非所有病原体都会产生可测量免疫反应。