H5和H9亚型禽流感病毒压电免疫传感器和超敏荧光试纸条检测方法.pdf

SN/T5043—2018

H5和H9亚型禽流感病毒压电免疫

传感器和超敏荧光试纸条检测方法

1范围

本标准规定了H5、H9亚型禽流感病毒压电免疫传感器和荧光免疫层析试纸条检测方法。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验力法

GB/T18088出入境动物检疫采样

3原理

压电石英晶体免疫传感器是以石英品体为换能器件，各种生物分子为敏感元件，将抗原与抗体

受体与配体等相互作用的生物信号以及所处体系性状的变化转变成易于检测的频率信号的一种生物传

感器。压电石英品体免疫传感器检测是利用抗原与抗体特异性结合后产生的微小质量变化，通过传感

器进行快速、灵敏的检测

荧光免疫试纸条检测是将荧光微球标记特异的禽流感病毒单抗，将另一种特异的禽流感病毒单

抗先固定于硝酸纤维素膜的检测区带(T线),将抗鼠IQG抗体固定于硝酸纤维素膜的质控区带(C

线),在加人待测样品后，基于侧流免疫层析原理，样品中的禽流感病毒与荧光微球标记禽流感病毒

特异性单抗结合后，流经检区，与另一种特异性禽流感病毒单抗结合，形成抗体-抗原-荧光微

IgG

球标记抗体免疫复合物，同利全4荧光微球标记肉流感病毒抗体在质控区与抗鼠抗体结合。形

成抗体-荧光微球标记抗体复合过灵散测定荧光微粒产生的荧光信号，从而得到结合在荧光微

粒上的各种免疫复合物的定量分析结果游一种新颖的快速检测方式

4试剂与材料

4.1水：符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2H5H9HI

、亚型禽流感病毒阳性对照：由国家禽流感参考实验室提供的标准(血凝抑制试验)

检测抗原(灭活全病毒)。

4.3阴性对照物为未感染禽流感病毒的禽组织悬液或阴性尿囊液，空白对照为样品处理液。

4.4H5H9

、亚型禽流感病毒压电免疫传感器

4.5H5、H9亚型禽流感病毒荧光免疫层析试纸条。

4.6棉拭子样品处理液：见附录A中A.I。

AA.2

4.7组织样品处理液：见附录中。

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5器材和设备

5.1压电芯片蛋白测定仪。

5.2荧光免疫层析试纸条检测仪。

5.3电热恒温水浴锅。

5.4组织研磨器。

5.5低温高速离心机。

5.6计时器。

6样品采集与处理

6.1样品的采集

6.1.1禽流感样品采样应按照GB/T18088中的规定采样，并按照相关规定做好生物安全防护。

6.1.2将棉拭子插入禽类的咽喉、肛门或者粪便中左右搅动。取出后放入含2mL样品处理液的离心

管中混匀，可直接用于检测。也可直接采取待检组织，不少于2g,放置于无菌容器中。

6.2样品贮运

样品采集后，放入密闭的样品袋内(一个采样点的样品，放一个样品袋),于保温箱中加冰、密

封，送实验室。

6.3样品处理

将棉拭子与2mL样品处理液充分混匀，编号备用。或直接用1mL组织样品处理液悬浮0.5g待

检组织样品，研磨均匀后，10000r/min离心5min,取上清用于检测。

6.4样本存放

制备的样本在2℃-8C条件下保存应不超过24h,若需长期保存应置于-70℃以下，但应避免

反复冻融(冻融不超过3次)。

7设立检测对眼

在样品处理过程中必须设立阳性对照、阴性对照和空白对照，并与待检样品一起处理。

取H5、H9亚型禽流感病毒HA(血凝试验)抗原作为阳性对照，阳性对照物HA效价不小于

1:64,由国家禽流感参考实验室提供。

取正常的禽组织