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辣椒素合成酶活力的测定
1范围
本文件描述了测定辣椒素合成酶活力的方法。
本文件适用于生化试剂及科研试验中辣椒素合成酶活力的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期
的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括
所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T21266辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
辣椒素合成酶活力单位capsaicinsynthaseactivityunit
在37℃、pH6.8的条件下，每小时生成1μmol辣椒素所需的酶量为一个酶活力单位，单
位为U。
4原理
辣椒素合成酶催化香兰素胺和8-甲基-6-壬烯酰CoA反应生成辣椒素，通过高效液相色
谱测定辣椒素的生成量，来计算酶活力。
5试剂
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。
5.1香兰素胺：CAS号7149-10-2，纯度≥98%。
5.2乙酰CoA：CAS号102029-73-2，纯度≥93%。
5.3ATP：CAS号987-65-5，纯度≥98%。
1
T/CAB
5.48-甲基-6-壬烯酸：CAS号59320-77-3，分析纯。
5.5磷酸钾缓冲液：500mmol/L，pH6.8。
5.6盐酸溶液：500mmol/L。
5.7氯仿：色谱纯。
5.8甲醇：色谱纯。
5.9辣椒素标准品：纯度≥95%。
5.10反应底物溶液：含0.5M磷酸钾缓冲液，pH6.8，1μMMgCl，1μMATP，5μM香
2
兰素胺，5μM8-甲基-6-壬烯酸和5μM乙酰CoA。
使用分析天平准确称取0.095mgMgCl、0.551mgATP、0.948mg香兰素胺、0.851mg
2
8-甲基-6-壬烯酸和4.378mg乙酰CoA溶解在950mL的磷酸钾缓冲液（5.5）中，转移至1L
容量瓶定容，充分混匀，现用现配。
6仪器设备
6.1分析天平：感量为0.001mg。
6.2pH计：精度为0.01。
6.3恒温水浴锅：温度精度为1℃。
6.4高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外检测器。
6.5移液器：1000μL。
7试样制备和试验步骤
7.1试样酶液的制备
使用移液器移取适量辣椒素合成酶液体样品溶于水中进行稀释，使待测酶液活力控制在
15U/mL以下。
7.2辣椒素合成酶活力的测定
将适量酶液加入1mL反应底物溶液中开始反应，反应混合物在37℃±1℃温育2小时后，
用0.5MHCl终止反应。反应产物用氯仿萃取浓缩后溶于100μL甲醇，以HPLC测定辣椒素的
含量。
7.3辣椒素含量的测定
按照GB/T21266中的方法测定辣椒素的含量。
2
8试验数据处理
试样中辣椒素合成酶活力按式（1）计算：
1000×××
=1····················································(1)
××2
式中：
X——辣椒素合成酶活力，单位为酶活力单位每毫升（U/mL）；
C——HPLC测定的辣椒素含量，单位为微克每毫升（μg/mL）；
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