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ICS11.220B41
DB21
辽宁省地方标准
DB21/T2592.3—2016
鸡传染性疾病检测方法
第3部分:鸡马立克氏病毒实时荧光PCR
检测方法
Detectionmethodofchickeninfectiousdisease
Part3:Thetestingmethodofreal-timefluorescentPCRforchickenMareksdisease
2016-03-18发布2016-05-18实施
辽宁省质量技术监督局发布
I
DB21/T2592.3—2016
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3缩略语 1
4仪器与器材 1
4.1仪器 1
4.2器材 1
5试剂和材料 2
6操作步骤 2
6.1样品的采集、存放和运送 2
6.1.1采样工具 2
6.1.2样品的采集 2
6.1.3存放与运送 2
6.2实时荧光PCR检测 3
6.2.1DNA提取 3
6.2.2扩增体系的配制 3
6.2.3加样 3
6.2.4荧光PCR扩增检测 3
7结果判定 3
7.1阈值设定 3
7.2质控标准 4
7.3结果描述及判定 4
附录A(规范性附录)磷酸盐缓冲生理盐水配方 5
II
DB21/T2592.3—2016
前言
标准《鸡传染性疾病检测方法》按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。标准《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分:
——鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法——鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测方法
——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法
本部分为标准《鸡传染性疾病检测方法》的第3部分本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。
本部分由辽宁省畜牧兽医局归口。
本部分起草单位:辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。
本部分主要起草人:王宏燕、曹东、闫海滨、石霖、赵培、何欣、薛树山、齐德林、李井春、马建山、姚伟、孙洪志
1
DB21/T2592.3—2016
鸡传染性疾病检测方法
第3部分:鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法
1范围
本标准规定了鸡马立克氏病毒(Mareksdiseasevirus,MDV)实时荧光PCR检测方法的实验技术要求。
本标准适用于鸡马立克氏病毒的检测和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范
3缩略语
下列缩略语适用于本标准。
MDV:鸡马立克氏病毒(Mareksdiseasevirus)Ct值:循环阈值(cyclethreshold)
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)
实时荧光PCR:实时荧光聚合酶链式反应(real-timefluorescentpolymerasechainreaction)PBS:磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebuffersaline)
4仪器与器材
4.1仪器
4.1.1分析天平
4.1.2高速离心机
4.1.3荧光PCR扩增仪
4.1.4冰箱(4℃,-20℃,-70℃)
4.1.5水浴锅
4.1.6微量移液器(最大量程为2μL,20μL,200μL,1000μL)
4.2器材
4.2.1组织匀浆器或研钵
4.2.2眼科剪
4.2.3眼科镊
4.2.4刀片
4.2.51.5mL灭菌离心管
4.2.6PCR八联排管或96孔板
2
DB21/T2592.3—2016
4.2.7吸头(10μL,200μL,1000μL)
4.2.8灭菌双蒸水
4.2.9称量纸
5试剂和材料
除特别说明以外,本标准所用试剂均为分析纯。
5.1DNAzol?Reagent:DNA抽提试剂,外观为淡绿色,于4℃~8℃保存。
5.2SYBR?Gr
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