- 1、本文档共17页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
ICS65.020
B16
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2257—2012
芒果细菌性黑斑病原菌分子检测技术规范
Moleculardetectionforpathogenofmangobacterialblackspotdisease
2012-12-07发布2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
I
NY/T2257--2012
前言
本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由农业部农垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。
本标准起草单位:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。
本标准主要起草人:蒲金基、漆艳香、谢艺贤、张欣、张贺、陆英、张辉强。
NY/T2257—2012
芒果细菌性黑斑病原菌分子检测技术规范
1范围
本标准规定了芒果细菌性黑斑病原菌[Xanthomonascampestrispv.mangiferaeindicae(Patel,MonizKulkami)Robbs,Ribeiro.Kimura]分子检测方法。
本标准适用于芒果树叶片、枝条、果柄和里安细萌性黑斑病原菌的定性检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件不可少聊B坦期的引注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引其最本(包插所有的修改单)用于
SN/T1193基检测夹验室
3术语和定义
下列术语和适K
3.1
芒果细菌
又称芒
pv.mangife
疫性细菌病
A.8。
3.2
致病性基
HrpB基
及抗病植物产
斑病菌性
病害
敏性反
3.3
聚合酶链式elyme模板基因序列好高遢变
计的两条引物分别与DNA
酶的作用下以四种脱氧和核酸(dN
一循环,使欲扩增的基因片几何倍数建
短的
工物的致
scampestris
害芒果的检
A.6、A.7和
和诱导非寄主
on
I聚合酶作用和适宜的反应,根据模板序列设
应的一段而互加合,接着在DNA聚合
底物使物得以延伸,然后不魔复变性、退火和延伸这
4原理
根据芒果细菌性黑斑病原菌过敏性反应和致病在基囚HrpB序列特有碱基信息设计特异性引物,对待检样品进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期321bp的DNA片段,判断样品中是否携带芒果细菌性黑斑病原菌。
5仪器设备及试剂
见B.1、B.2。
6取样
按附录A描述的症状仔细检查芒果树叶片、枝条、果柄和果实,发现芒果细菌性黑斑病疑似症状,
2
NY/T2257—2012
即取叶片、枝条、果柄或果实200g以上,装入牛皮纸袋中,送实验室检测。
7PCR检测
7.1PCR反应模板制备
见B.4.1。
7.2PCR反应
在PCR薄壁管中分别加入以下试剂(25μL体系)后进行PCR反应:1μL基因组DNA,10×PCR缓冲液(Mg2+Plus)2.5μL,脱氧核糖核苷酸(dNTP)混合物2μL,特异性引物(见表1)各0.5μL,Taq酶0.2μL,灭菌超纯水18.3μL。
表1PCR反应的引物序列及扩增产物
引物名称
引物序列
预期扩增产物
XcmHF
5-GGTGGTCGAACTCGTCGGCAT-3
321bp
XcmHR
5-GCCTGCGCCTGGATCGGTAT-3
反应条件:95℃预变性3min,后30个循环为95℃变性30s至60s;58℃退火45s至60s;72℃延伸1min;最后72℃延伸5min。取出PCR反应管,对反应产物进行电泳检测或4℃条件下保存,存放时间不超过24h。
7.3反应体系中对照的设置
7.3.1阳性对照
用芒果细菌性黑斑病原菌基因组DNA作为模板。
7.3.2样品对照
用健康芒果种胚组织提取的基因组DNA作为模板。
7.3.3PCR反应体系对照
用配制反应体系的无菌超纯水代替DNA模板,检测试剂是否受到污染。
7.4PCR产物凝胶电泳检测
7.4.1凝胶制备
见B.4.2。
7.4.2加样与电泳
见B.4.3。
7.5凝胶成像分析
将整块琼脂糖凝胶置于紫外凝胶成像仪系统观察窗内,根据DNA分子量标准估计扩增条带的大小,并拍照保存,参见图1。
7.6防污染措施
检测过程
您可能关注的文档
- GBT 9649.20-2009 地质矿产术语分类代码 第20部分:水文地质学.docx
- DB50 350-2010 重庆市水文资料采集整编及汇交标准.docx
- DB50T 506-2013 重庆市水文建设工程质量评定规程.docx
- SL 732-2015 感潮水文测验规范.docx
- SNT 3235-2012 出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法.docx
- DB50 349-2010 重庆市水文技术装备标准.docx
- NBT 35021-2014 水电站调压室设计规范.docx
- SL 205-2015 水电站引水渠道及前池设计规范.docx
- DB50T 468-2012 重庆市水文巡测技术标准.docx
- NBT 35011-2016 水电站厂房设计规范.docx
文档评论(0)