农业部2406号公告-7-2016 转基因动物及其产品成分检测 DNA提取和纯化.docxVIP

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中华人民共和国国家标准

农业部2406号公告一7—2016

转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化

Detectionofgeneticallymodifiedanimalsandderivedproducts—DNAextractionandpurification

2016-05-23发布2016-10-01实施

中华人民共和国农业部发布

I

农业部2406号公告—7—2016

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会(SAC/TC276)归口。本标准起草单位：农业部科技发展中心、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：敖红、沈平、李奎、宋贵文、崔文涛、章秋艳、周荣、金芜军、陶聪、赵为民、黄素娟、

甄二东。

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农业部2406号公告一7—2016

转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化

1范围

本标准规定了转基因动物及其产品中DNA提取和纯化的方法和技术要求。本标准适用于转基因动物及其产品中DNA的提取和纯化。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所得的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

通过物理和化学方法使DNA从样品的不同组分中分离出来。利用不同的纯化方法，弃除样品中的蛋白质、脂肪、多糖和其他次生代谢物，以及DNA提取过程中加入的氯仿、异戊醇等化合物，获得纯化的DNA。

4主要试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682二级水要求的水。

4.1异戊醇(C?H??O)。

4.2氯仿(CHCl?)。

4.3乙醇(C?H?OH),体积分数为95%。

4.4二水乙二铵四乙酸二钠盐(Na?EDTA·2H?O,C??H?N?O?Na?·2H?O)。

4.5十二烷基硫酸钠(C??H??O?SNa,SDS)。

4.6盐酸(HCl),体积分数为37%。

4.7异丙醇[CH?CH(OH)CH?]。

4.8蛋白酶K(20U/mg)。

4.9乙酸钾(KAc)。

4.10氯化钠(NaCl)。

4.11氢氧化钠(NaOH)。

4.12三羟甲基氨基甲烷(C?H??NO?,Tris)。

4.13磷酸氢二钠(Na?HPO?)。

4.14磷酸二氢钾(KH?PO?)。

4.15甲醛(HCHO),体积分数为35%～40%。

4.16聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-x100)。

4.1710mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后再加水定容至

200mL。

4.180.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na?),加入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液，加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠溶液(4.17)调

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农业部2406号公告一7—2016

pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

4.191mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶解于

800mL水中，用盐酸(HCl)调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20

min。

4.205mol/L氯化钠溶液：称取29.22g氯化钠(NaCl)溶于80mL水中，加水定容至100mL。在

103.4kPa蒸汽压(121℃)条件下灭菌20min。

4.213mol/L乙酸钾溶液(pH4.8):称取29.43g乙酸钾(KAc)溶于60mL水，用冰乙酸(HAc)调pH至4.8,加水定容至100mL。在103.4kPa蒸汽压