SN∕T 4864-2017 转基因玉米检测 微流体芯片检测方法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4864—2017

转基因玉米检测微流体芯片检测方法

Transgenicmaizedetection—Taqmanarraycardmethod

2017-07-21发布2018-03-01实施

中、华人民共和国

国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T4864—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、LifeTechnologiesBrand、ThermofisherScientificCorp、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：徐君怡、曹际娟、YaleiWu、郑秋月、徐杨、那晗、JennyXiao、贺艳、王建新、黄志、陈大军。

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SN/T4864—2017

转基因玉米检测微流体芯片检测方法

1范围

本标准规定了食品中转基因玉米TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25等17个品系的微流体芯片检测方法。

本标准适用于玉米及其加工产品中转基因玉米TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、

MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25等17个品系的定性筛查检测。

本方法的定性检测低限为1%(质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注目期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

转基因transgene

将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导入手段，使其在该物种中进

行表达，以便该物种获得新的品种特征。

3.2

内源基因endogenousgene

在栽培的物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于对基因组中某一目的基因的定量分析。

3.3

外源基因exogenousgene

利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。

4方法原理

TaqMan技术是一种应用于核酸实时PCR检测的专利技术。该技术使用根据靶标核酸设计合成的DNA单链，并在单链的两端分别偶联上荧光报告基团和荧光淬灭基团，此结构称为TaqMan探针。

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在PCR扩增的过程中，TaqDNA聚合酶会切断特异性结合在靶标DNA链上的TaqMan探针，使得探针的荧光报告基团发出特定波长的荧光，实现DNA分子的扩增与反应体系发出的荧光增长具有高度的一致性同步。通过荧光检测仪器，即可在PCR扩增的过程中，实时地检测或者定量反应体系中的DNA分子数目。

TaqMan微流体芯片将TaqMan探针包埋于微流体芯片检测卡中，使用TaqMan技术进行检测。

5仪器设备和主要试剂

5.1仪器设备

高速冷冻离心机；水浴培养箱；天平：感量0.001g;TaqMan微流体芯片兼容PCR仪(适用的机型包括7900fastHT、ViiA7、QuantStudioQ7、QuantStudio12K);带有离心适配器的高速离心机；超净工作台；制冰机；核酸蛋白分析仪；低温冰箱；纯水器或双蒸水器；旋涡振荡器；微量进样器(0.5μL、2μL、100μL)。

5.2主要试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格：TaqMan微流体芯片检测卡；氯仿；异戊醇；异丙醇：70%乙醇；CTAB裂解液：3%CTAB(质量与体积的比值),1.