高效液相色谱PPT课件 (1).ppt

;;第四章高效液相色谱法

(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC);1．高效液相色谱法与经典液相色谱法;2．高效液相色谱法与气相色谱法;二、高效液相色谱仪

;;;⑴储液罐;⑵高压输液泵;②高压输液泵的分类;;A、液压隔膜泵

;B、气动放大泵;C、注射泵;D、往复柱塞泵;D、往复柱塞泵;⑶梯度洗脱装量;2．进样系统;;3分离系统——色谱柱;4．检测系统;;A、紫外检测器的分类与特点;a单波长紫外检测器

;b多波长紫外检测器;c紫外—可见分光式检测器

;d扫描型可变波长紫外检测器;e光电二极管陈列紫外检测器

;光路特点;工作原理

;应用

;;;（2）荧光检测法;工作原理;（3）电化学检测法;理论基础;电化学检测种类;（4）化学发光检测法：;（5）示差折光率检测器

;（6）蒸发光散射检测器：ELSD;（7）常用检测器的比较;(8)银杏黄酮提取物标准;三、高效液相??谱的固定相和流动相;分类：

;1.表面多孔型固定相;2．全多孔型固定相;;（二）流动相

;;四、高效液相色谱法的主要类型及选择;;3．流动相

基本要求：

尽可能不与固定相互溶，

流动相与固定相的极性差别越显著越好

正相分配色谱：

流动相的极性小于固定相的极性，

它适用于极性化合物的分离。

极性小的先流出，极性大的后流出。

反相分配色谱：

流动相的极性大于固定相的极性。

它适用于非极性化合物的分离，

其流出顺序与正相色谱恰好相反。;（二）化学键合相色谱法（CBPC）;1．键合固定相类型

;2．键合固定相的制备

（l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相。

用醇与硅醇基发生酯化反应：

≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20

特性：传质特性好,但易水解且受热不稳

定，仅适用于不含水或醇的流动相。

（2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相

制备反应如下;;;（3）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相

制备反应如下：;C18柱的反应与钝化;特性：

这类键会固定相具有热稳定好，

不易吸水，

耐有机溶剂的优点。

能在70℃以下，

PH=2～8范围内正常工作，

应用较广泛.;3．反相健合相色谱法;分离机理;分离机理;;分离机理;4.正相键合相色谱法;5.离子性键合相色谱法;;（三）液一固吸附色谱法(LSAC)

;;2．固定相;3流动相;;(四）离子交换色谱法（IEC）;1．离子交换原理

待测离子对固定相（离子交换树脂）亲和力的差别来实现分离的。

阳离子交换：;达平衡时，平衡常数（离子交换反应的选择系数）：

KB/A=[A][B]r/[B][A]r，;;2．固定相

基质有三大类：

合成树脂（聚苯乙烯）

纤维素

硅胶。

离子交换剂：阳离子和阴离子。

;;;3．流动相;（五）离子色谱法（IC）;R+－OH＋H+Cl--→R+－Cl十H2O

R+一OH-＋M+Cl--→M+OH－＋R+－Cl-

由反应可见：

一方面将大量酸转变为电导很小的水，

消除了流动相本底电导的影响。

同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，

OH-淌度为Cl-的2．6倍，

提高了电导检测灵敏度。

对于阴离子样品也有相似的作用机理。

亦称为抑制型离子色谱

或称双柱离子色谱。

;抑制柱要定期再生;（六）离子对色谱法（IPC）;色谱机理;离子对化合物A-B+具有疏水性，

被非极性固定相（有机相）提取。

如组分离子的性质不同，

它与反离子形成离子对的能力大小不同

形成的离子对疏水性质不同，

各组分离子在固定相中滞留时间不同，

因而出峰先后不同。

——基本原理。;;

k=DAVs/Vm=KAB〔B+水〕Vs/Vm;（七）尺寸排阻色谱法（SEC）;提问与解答环节

Questionsandanswers;结束语?CONCLUSION

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