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第47卷第5期遵义医科大学学报Vol.47No.5
2024年5月
JournalofZunyiMedicalUniversityMay.2024
技术与方法
基于多交叉置换扩增和纳米生物传感技术快速检测肺炎支原
体方法的建立
肖飞,郑宝英,徐文健”,伏瑾,黄小兰,孙春荣,贾楠,张裕,
许,周娟,王毅
附属儿童医院检验中心,北京100020)
【摘要】目的建立一种简单、灵敏、快速的肺炎支原体(MP)检测方法,并对其应用性进行验证和评价。方法利用多交叉
置换扩增(MCDA)技术对肺炎支原体特异基因CARDS毒素基因进行扩增,利用侧流免疫层析生物传感(LFB)技术读取扩
增结果,命名该方法为MP-MCDA-LFB。分析扩增反应在60~67℃(间隔1℃)的扩增效率,筛选最适反应温度;分析分别
扩增10、20.30、40min时能够检测到的最低核酸浓度,筛选最佳反应时间。利用10倍系列稀释的肺炎支原体核酸分析
MP-MCDA-LFB方法的灵敏度和检测限,利用35株非肺炎支原体菌株分析MP-MCDA-LFB方法的特异性。利用MP-MCDA-
LFB方法检测80份疑似MP感染的临床样本,并与RT-PCR法检测结果进行比较,分析MP-MCDA-LFB方法的临床应用性。
结果MP-MCDA-LFB能够实现对肺炎支原体CARDS毒素基因的快速检测。其最佳反应温度为63℃,最短反应时间为40
min,整个检测过程可在1h内。MP-MCDA-LFB方法具有较高的灵敏度和特异性,其检测限低至45ng/L,与其他临床表现
相似的病原体无交叉反应,特异性为100%。MP-MCDA-LFB方法从80份临床样本中检出45份阳性样本(56.3%),检出率
与RT-PCR方法一致。结论本研究建立的以CARDS毒素基因为靶标的MP-MCDA-LFB检测方法具有简单、快速、灵敏度
高、特异性强的优点,在基层医疗机构和现场检测具有较好的应用潜力。
【关键词】肺炎支原体;多交叉置换扩增技术;侧流免疫层析生物传感技术;CARDS毒素基因;RT-PCR
[中图法分类号]R375+.2
2【文献标志码]A[
[文章编号]2096-8159(2024)05-0513-09
Establishmentofrapiddetectionofmycoplasmapneumoniaeonthebasisof
multiplecrossdisplacementamplificationandnanoparticle-basedbiosensor
XiaoFei,ZhengBaoying”,XuWenjan,FuJin,HuangXiaolan,SunChunrong,
JiaNan,ZhangYu,XuZheng,ZhouJuan,WangYi!
(1.ExperimentalCenterofCapitalInstituteofPediatrics,Beijing100020;2.DepartmentofRespiratory,Chil-
drensHospitalAffiliatedtoCapitalInstituteofPediatrics,Beijing100020;3.TestingCenterofChildrens
HospitalAffiliatedtoCapitalInstituteofPediatrics,Beijing100020)
[Abstract]ObjectiveToestablishasimple,sensitiveandrapiddetectionmethodforMycoplasmapneumoniae
(M.pneumoniae)andevaluateitsapplication.MethodsMultiplecross-displacementamplification(MCDA)re-
act
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