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培养基的配制及灭菌实验报告

篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)

一、实验题目：培养基的制备与灭菌

二、实验目的：

1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：

1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、

报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：

1、培养基的制备

包括一下几种成分：

（1）水分：主要成分。

（2）n源：包括无机氮和有机氮。

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（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些

氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则

根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，

但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：

按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基

按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基

按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择

培养基

培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富

集。

3、灭菌：

用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，

在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消

毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，

加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力

上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、

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121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若

是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变

性。因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以

温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复

制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22

μm）。除病菌需更小。

五、实验步骤：

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备

依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放

入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，

并加入1.5g琼脂。加上棉塞，迅速拔出能发出清脆声响即

可，用报纸包住并系好麻绳。

2、包移液管和培养皿

（1）包一包培养皿（一包五个）：用手压紧、塞好，折

出棱角，包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。

（2）包2支移液管：用棉花塞好移液管尾部，露出1~2cm

即可。取长条报纸，一端折

90°角，紧密实沿30°角卷好移液管，尾部叠好防止

散开。

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3、高压蒸汽灭菌

（1）灭菌前要先看水位是否合适。

（2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，

棉塞不应染上培养基。

（3）加盖，两两对称旋紧螺栓。

（4）设定条件：0.1mpa、121℃、20min，进行加热。

（5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。

（6）结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀

取出物品。

4、干热灭菌

（1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门

箱。

（2）设定条件：160~170℃，恒温2h。

（3）结束后，切断电源，自