实验四PCR产物的T载体克隆和转化演示文稿.pdf

实验四PCR产物的T载体克隆和转

化演示文稿

在是1\一共有38\于星期一

重组DNA技术操作步骤

在是2\一共有38\于星期一

Ø基本原理

目的基因的获取克隆载体的选择和构建

外源基因与载体的连接DNA导入受体细胞

重组体的筛选克隆基因的表达

在是3\一共有38\于星期一

Ø主要步骤：

①制备目的基因和选择相关载体

②目的基因和有关载体进行连接

③重组的DNA导入受体细胞

④DNA重组体的筛选和鉴定

⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究

在是4\一共有38\于星期一

以

质

粒

为

载

体

的

DNA

克

隆

过

程

在是5\一共有38\于星期一

一、目的基因的获得——分

（一）从基因组文库中获得

（二）从cDNA文库中获得

（三）PCR扩增特定基因

（四）人工合成

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Ø从基因组DNA文库组织或细胞染色体DNA

获取目的基因

限制性内切酶

基因片断

基因组DNA文库克隆载体

存在于转化细胞内

重组DNA分子

由克隆载体所携带的所

有基因组DNA的集合受体菌

含重组分子的转化菌

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限制酶切位点真核生物染

cosLRcos色体DNA

限制酶消化限制酶部分消化

除去中间片段

cosLRcos

左臂右臂~20KbDNA片段

外源DNA与载体DNA混合

cosL~20Kb外源DNA片段Rcos