实验三血清中总胆固醇的测定课件.pptVIP

实验三血清中总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法）

一、实验目的?学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。?掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。

二、实验原理游离胆固醇血清总胆固醇（1）胆固醇酯酶胆固醇酯游离胆固醇＋FAA（2）游离胆固醇胆固醇氧化酶胆甾烯酮+H2O2（3）HO+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚22过氧化物酶（POD）HO＋红色醌类物质2510nm光吸收法测定相对血清总胆固醇浓度

三、实验器材材料：人血清试剂：总胆固醇测定试剂盒用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架，恒温水浴锅

四、实验步骤（1）取3支试管，按下表加入试剂:试剂空标准样品管样品管2样品管试剂白管管13工作试剂(mL)1.01.01.01.01.0–标准液(uL)–10.0––血清样品(uL)––10.010.010.0充分混匀，37℃水浴中保温15min；冷却至室温后，510nm处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。

（2）计算：依据朗伯-比尔定律：A=KLC标准管胆固醇浓度：5.17mmol/LC=A样A标×C标样品管光密度值样样品管胆固醇浓度＝(mmol/L)×5.17标准管光密度值

参考值胆固醇血清参考值：3.0~5.20mmol/L危险阈值：5.20~6.20mmol/L高胆固醇血症：6.20mmol/L