用于鉴定云豹的多重pcr引物和方法以及它们在鉴定云豹中的应用的制作方法.pdf

用于鉴定云豹的多重pcr引物和方法以及它们在鉴定云豹中

的应用的制作方法

用于鉴定云豹的多重pcr引物和方法以及它们在鉴定云豹中

的应用的制作方法

本发明公开了一种用于鉴定云豹的多重PCR引物，其中，所

述多重PCR引物包括如SEQ?ID?No：1和SEQ?ID?No：2所示

的引物对1，以及如SEQ?ID?No：3和SEQ?ID?No：4所示的

引物对2。本发明还公开了一种利用多重PCR鉴定云豹的方

法，该方法包括：提取待测样品的总DNA并对总DNA进行PCR

扩增；将扩增后的产物做琼脂糖凝胶电泳检测；其中，所述

多重PCR引物为上述多重PCR引物，若泳道中出现2条条带，

则判断所述待测样品为来自云豹的样品。本发明还公开了一

种上述多重PCR引物或鉴定方法在鉴定云豹中的应用。通过

设计上述两对引物，实现了简便易行且经济实用地鉴定云豹

的目的。

【专利说明】用于鉴定云豹的多重PCR引物和方法以及它们

在鉴定云豹中的应用

【技术领域】

[0001]本发明涉及生物检测领域，具体地，涉及一种用于

鉴定云豹的多重PCR引物及使用所述多重PCR引物鉴定云豹

的方法，以及它们在鉴定云豹中的应用。

【背景技术】

[0002]基于分类学的准确物种鉴定是人类认知自然和可

持续发展的必要前提。它为生物多样性的保护、物种资源的

可持续性利用，以及生物来源的新产品开发等提供了知识和

理论基础。对于物种的鉴定，传统的方法主要是采用形态学

证据来进行。但该方法的一些缺陷也造成了濒危动物保护

工作的局限，例如表型可塑性和遗传可变性、无法区分隐存

分类单元、受生物性别和发育阶段限制等。在野生动物保护

的实践工作中，一些来源不明的送检动物样品往往是不完

整且样品量较小，已很难从形态学上加以识别，如毛发、残

肢、腐败组织、骨骼、皮张及粪便等。但是，根据《中华人

民共和国野生动物保护法》的规定，准确的物种信息是量

刑的重要法律证据，直接涉及到犯罪嫌疑人的切身权力和行

政部门的严格执法问题。

[0003]云豹（Neofelisnebulosa)是哺乳纲（Mammalia)

食肉目（Carnivora)猫科(Felidae)云豹属（Neofelis)的猫

科动物。云豹身体两侧具云状的暗色斑纹，体长约70?110

厘米，尾长约70?90厘米，体重约16?40千克，为豹亚科最

小者。云豹在中国的分布北限在陕西秦岭、甘肃南部，西至

西藏察隅等地，南止于海南省，东至浙江省及台湾省。我

国共有两个亚种：指名亚种（Neofelisnebulosanebulosa),

我国云豹皆为指名亚种；台湾亚种（Neofelisnebulosa

brachyurus)，现已灭绝。云豹作为食物网中的顶级食肉动

物，捕食多种动物，在营养级序列中占据着多个级别，也是

维持生态系统功能和生物多样性水平的关键物种。与世界其

它的猫科动物一样，云豹同样受到分布密度低、活动范围大、

猎物数量下降、偷猎等因素的广泛威胁。在中国，云豹已被

列为国家一级重点保护野生动物。在全世界，也被列入世界

自然保护联盟（IUCN)易危（VU)级物种，同时还被《濒危野

生动植物种国际贸易公约》(CITES)列入附录I物种，云豹

及其物种产品被严格禁止国际商业贸易。因此，在实际的野

生动物保护工作中，对云豹物种及其相关制品进行科学、准

确地物种鉴定是开展各项执法工作的前提。

[0004]另一方面，由于受到活动隐匿、难以捕获等原因的

限制，目前开展有关大型猫科动物的种群生态学研究只能

依赖于间接的证据，例如痕迹证据（如足迹、擦痕、尿迹及

抓痕等）和对当地居民的走访调查等。但痕迹仅能对野生云

豹种群提供定性的数据，并不能实现跟踪并监测野外种群

的数量动态波动。近年来，以动物粪便为研究材料的粪便DNA

分析技术极大地扩展了非损伤性取样的范围，丰富了保护遗

传学的研究技术。通过对粪便DNA中多种遗传标记的识别，

研究者可以对野生动物的种群数量调查、领域边界划定、生

活史、种群遗传结构和遗传多样性等方面进行深入的研究。

在开展基于粪便DNA的兽类种群生态学研究中，往往需要研

究者首先对采自野外的大量兽类粪便样品根据粪型特点进

行初步的判别，将云豹物种的粪便单独挑选出来备用，这是

一项非常耗费时间的前期准备工作。同时，由于粪型等形态

学特征往往在野外及送回实验室的运输过程中