免疫检测技术.pptx

;免疫检测是当前生物学检测方法中用途最广泛一个方法。

含有高度准确、灵敏、特异特点。

可用于免疫学基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究各个领域。;1、免疫疾病诊疗

2、动物植物生理活动研究（激素、维生素）

3、物种及微生物判定

4、动物、植物性状免疫标识

5、免疫增强药品和疫苗研究

6、发病机理研究

7、分子生物学研究;第一节抗原抗体反应原理;一、体外抗原抗体反应特点;网格理论——解释抗原抗体形成沉淀机制;;二、影响抗原抗体反应原因;三、抗原抗体反应类型;第二节常见免疫检测方法;一、免疫沉淀反应

;絮状沉淀试验;环状沉淀试验;2.凝胶扩散沉淀;单向琼脂扩散试验;单向免疫扩散试验示意图;双向免疫扩散试验;;3.免疫电泳技术;血清免疫电泳;免疫电泳原理图解;火箭免疫电泳;

;二、凝集反应（Agglutination）;;妊娠免疫诊疗试验;三、补体结合试验;已知抗原加入血清（检测抗体）;

免疫标识技术是采取酶、荧光素、放射性核素等标识物标识抗原或抗体所进行抗原抗体反应。

免疫标识技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提升了方法灵敏度，是当前应用最广泛免疫学检测技术。

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;该法是用放射性核素作为标识物标识抗原或抗体

所进行抗原抗体反应，尽管放射免疫技术需特殊

仪器设备且有一定放射性危害，但因为其含有高

度灵敏度（pg）和自动化检测等特点，所以在实

验研究和临床检测中仍被广泛应用。

主要用于激素、小分子药品、肿瘤标志物等

小分子化合物定量分析。;放射免疫分析－基本原理;;RIA法原理及标准曲线;

将荧光素（异硫氰酸荧光素或罗丹明等）标识抗体，

制成荧光抗体诊疗试剂。

用荧光显微镜观察荧光产生或荧光强度，以此判断

抗原存在、定位和分布情况。

免疫荧光技术有直接法和间接法等。;免疫荧光技术——直接法;免疫荧光技术——间接法;免疫荧光染色显示细胞骨架;本法是抗原抗体反应特异性与酶对底物高效催

化活性相结合免疫检测技术。酶标识抗原或抗

体与待检标本中对应成份特异性结合，依据???作

用底物后颜色改变，采取肉眼或酶标检测仪分

析、判断结果。

惯用方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前

者用于检测可溶性抗原或抗体，后者惯用于检测组

织中或细胞表面抗原。;是在固相载体（通常为聚苯乙烯反应板）表面进行

抗原抗体反应。

试验中惯用酶是辣根过氧化物酶（HRP），底物

为二苯基联苯胺。;ELISA试验三个必要试剂;;五种常见检测方法;适合用于测定二价或二价以上大分子抗原，但不适合用于测定半抗原及低于二价小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心;;几个标识/检测技术灵敏度比较;几个标识/检测试剂使用期比较;;A.?将Ab吸附在固相载体表面;

B.加入酶标Ag和待测Ag，竞争结合Ab；对照只加入酶标Ag；

C.加底物。对照孔与样品孔底物降解量差＝未知Ag量。;

血清标本中IgM包含针反抗原特异性IgM抗体和非特异性IgM

加入特异性抗原试剂：它只与固相上特异性IgM结合

抗人IgM抗体包被加入血清标本加入特异性抗原试剂加入针对特异性抗原酶标抗体

加底物显色;捕捉法;ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)略语。

亲和素是一个糖蛋白，生物素为小分子化合物。

亲和素与生物素结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，二者一经结合就极为稳定。

1个亲和素分子可与4个生物素分子结合。

所以把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可提升ELISA敏感度。;ABS-ELISA法