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核酸分离纯化与测序PCR技术复习题及答案

一、填空题

1.SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用：

①溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；

②溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；

③对RNas、DNas有一定的抑制作用；

④SDS能够与蛋白质结合形成R-0-S03

一R一蛋白质复合物，使蛋白质变性沉淀。

...+

2.酚是蛋白质变性剂，用酚抽提细胞DNA时，具有两方面的作用：

①是蛋白质变性；

②由于它能使蛋白质变性，故也能使核小体和核糖体解聚，释放出DNA

和RNA,提高DNA的得率。

3.用酚一氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚一氯仿中加少许异戊

醇。这是因为，异戊醇是一种有机溶剂，可以降低表面张力，从而减少

气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、

中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

4.K:①

同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶具有两个显著的优点水解

②

能力强，作用范围广；在SDS和EDTA中仍保持高活性，可以同SDS和

EDTA同时使用。

5.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目

的是螯合Mg2+抑制核酸酶的活性。

6.用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如NaCl

和NaAc,其目的是中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。

7.DNA：4~5°C-20°C-70°C,-

通常可在三种温度下保存、、其中以

70°C最好。

①②

8.引物在因工程中至少有四个方面的用途：合成探针；合成

③

cDNA；用于PCR反应；

④进行序列分析。

9.Clar发现用DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一

个突出碱末端的双链

DNAPCRT

分子。根据这一发现设计了克隆产物的载体。

1%

10.在用SDS分离DNA时，要注意SDS的浓度，0.和1%的SDS的作

用效果是不同的，前者只

RNA,DNARNA

将分离出来后者可将和一同分离出来。

11.DNA

在分离过程中，通常要进行透析，其目的是除去小分子的无机

离子。

①

12.在分离质粒DNA的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：可以

扩增质粒DNA；

②抑制菌体数量，有于裂解。

13.在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多，主

①②

要有：核酸酶降解；化学降解；

③物理剪切。

14.在DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起抑制真菌污染的作

用。

15.按照人们的意愿，改变因中碱的组成，以达到因突变的技术

称为定点突变。

16.cDNAS1

在的合成中要用到核酸酶，其作用是切除在第二链合成时

形成的发夹环。

17.在简并引物的设计中，常常要用到di