常用荧光探针小结.pptVIP

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2024-07-21 发布于北京
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常用荧光探针小结.ppt

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常用荧光探针小结

一、异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate,FITC）

FITC有两种异构体，性质稳定，低温下干燥保存，其性状多年不变，室温下也能保存两年以上。异构体I、II均能与蛋白质良好结合，但异构体I的荧光效率更高，与蛋白质的结合也更稳定。FITC的最大吸收光谱为490----495纳米，最大发射光谱为520-530nm，呈明亮的黄绿色荧光。FITC含有异硫氰基，在碱性条件下能与IgG的自由氨基（主要是赖氨酸的?-氨基）形成荧光抗体结合物。;Exitationλmax:495nm;Emissionλmax:519nm;SolventpH:8.00;Immunocytochemistry/Immunofluorescence-alphaTubulinantibody[DM1A](FITC)(ab64503)

ICC/IFimageofab64503stainedhumanHeLacells.Thecellsweremethanolfixed(10min),permabilisedin0.1%PBS-Tween(20min)andincubatedwiththeantibody(ab64503,1μg/ml,FITCconjugated(green))for1hatroomtemperature.1%BSA/10%normalgoatserum/0.3Mglycinewasusedtoblocknon-specificprotein-proteininteractions.AlexaFluor?594WGAwasusedtolabelplasmamembranes(red).DAPIwasusedtostainthecellnuclei(blue).

;二、荧光素酯;视频：TheUseofCarboxyfluoresceinDiacetateSuccinimidylEster(CFSE)toMonitorLymphocyteProliferation;四甲基异硫氰酸罗达明，它是一种紫红色粉末，较稳定。其最大吸收光谱为550nm，最大发射光谱620nm，呈橙红色荧光，与FITC的黄绿色荧光对比清晰，与蛋白质结合方式同TITC。它可用于双标记示踪研究。;Detectionofα-tubulininA549cellsdemonstratesuseofrhodamine-labeledsecondaryantibody.

Cellswereprobedwithamouseanti-α-tubulinprimaryantibody(0.4μg/mL)andRhodamine-goatanti-mousesecondaryantibody(2μg/mL).NucleiwerelabeledwithHoechstDye.Imageswereacquiredbyfluorescencemicroscopy.A.Fluorescenceimageshowsadelicatenetworkofα-tubulin(pseudo-coloredgreen)locatedexclusivelyinthecytoplasm.B.NuclearcounterstainwithHoechstDye(pseudo-coloredblue)C.Mergedimage.;??????????????????????????????????????????????????????????

AC41323-0010

;ConfocalimageofdoubleimmunostainingforAktinhippocampalCA1pyramidalneurons.Sectionisshownfromanormalrat.TheredcolorderivedfromlissaminerhodamineconjugatedsecondaryantibodyrepresentsMAP2,thegreencolorderivedfromfluoresceinindicatesthelabelingofAkt.Yellowrepresentsoverlayofredandgreen.