用于鉴定人类腺病毒55型的引物组合物以及它们的应用的制作方法.pdfVIP

用于鉴定人类腺病毒55型的引物组合物以及它们的应用的

制作方法

用于鉴定人类腺病毒55型的引物组合物以及它们的应用的

制作方法

本发明公开了一种用于鉴定人类腺病毒55型的引物组合物

以及它们的应用。本发明提供的引物组合物，包括DNA片段

-Ⅰ、DNA片段-Ⅱ、DNA片段-Ⅲ和DNA片段-Ⅳ，均为单链DNA

片段，依次如序列1、序列2、序列3、序列4所示。所述引

物组合物还可包括单链DNA片段-Ⅴ和/或单链DNA片段-Ⅵ，

依次如序列5、序列6所示。本发明适用于对人类腺病毒55

型进行特异性检测和定量分析。本发明的优点：（1）只需

在恒定温度就能扩增反应，不需要特殊设备；（2）特异性

高；（3）快速高效，扩增反应在短时间内即可完成；（4）

灵敏度高；（5）鉴定方便简单。本发明特别适用于临床样

本中病毒的快速检测。

【专利说明】用于鉴定人类腺病毒55型的引物组合物以及

它们的应用

【技术领域】

[0001]本发明涉及一种用于鉴定人类腺病毒55型的引物

组合物以及它们的应用。

【背景技术】

[0002]人腺病毒（HumanAdenovirus,HAdV)是一群无包

膜的双链DNA病毒，分为1?55个血清型，分别划入A?F共6

个血清学分组。人腺病毒经呼吸道和消化道传播，引起多

种感染，对小儿和免疫缺陷者危害严重。腺病毒感染人体可

能引发的疾病包括：急性腺病毒肺炎、急性胃肠炎、眼角膜

炎、乳糜泻和急性间质性肾炎等。在儿童急性下呼吸道感染

患者中腺病毒感染阳性率可高达4.1%。在最近几十年的北

美、欧洲及亚洲均认为人类腺病毒B组感染是导致急性呼

吸系统感染（ARD)的重要因素。

[0003]HAdVlUHAdVH型属于腺病毒B组，传统的HAdVll

型主要导致肾及泌尿系统的感染，HAdVH则引起人呼吸系统

感染。新发现的人类腺病毒55型（HAdV55)，在其现之初命

名为HAdVlla，对人有较强的致病性，易在军队、学校等密

集人群发生呼吸道传染病流行，在免疫低下的人群中甚至

出现了死亡病例。基因分析表明HAdV55是HAdVH与HAdVll

的Hexon区域重组并发生若干核苷酸突变得到的毒株。

[0004]腺病毒的现有检测方法主要为普通PCR和实时荧

光定量PCR等。普通RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR等常需

要花费较长时间或者需要特定的仪器，难以满足暴发疫情快

速诊断的需要。

[0005]环介导等温扩增法（loop-mediatedisothermal

amplification,LAMP)法具有在等温条件下即可高速、高特

异、高灵敏的扩增靶序列的特点。该方法利用4条特异引物

（F3、FIP、B3和BIP)在高活性链置换DNA聚合酶作用下，

不断复制扩增核酸。在反应体系中可添加2条环状引物LF

和LB，它们也分别与茎环结构结合启动链置换合成，周而复

始。扩增的最后产物是具有不同个数茎环结构、不同长度

DNA的混合物。

【发明内容】

[0006]本发明的目的是提供一种用于鉴定人类腺病毒55

型的引物组合物以及它们的应用。

[0007]本发明提供的第一组引物组合物（引物组合物甲），

包括DNA片段-I、DNA片段_II、DNA片段-III和DNA片段

-IV;所述DNA片段-I、所述DNA片段-II、所述DNA片段-III

和所述DNA片段-IV均为单链DNA片段；所述DNA片段-I如

序列表的序列1所示，所述DNA片段-II如序列表的序列2

所示，所述DNA片段-III如序列表的序列3所示，所述

DNA片段-IV如序列表的序列4所示。所述引物组合物甲具

体可由所述DNA片段-I、所述DNA片段-II、所述DNA片段-III

和所述DNA片段-IV组成。所述引物组合物甲还可包括DNA

片段-V和/或DNA片段-VI;所述DNA片段-V和所述DNA片段

-VI均为单链DNA片段；所述DNA片段-V如序列表的序列5

所示，所述DNA片段-VI如序列表的序列6所示。所述引

物组合物甲具体可由所述DNA片段-I、所述DNA片段-II、

所述DNA片段-III