流式细胞术在临床和科研中的应用专家讲座.pptxVIP

流式细胞术（FLOWCYTOMETRY）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质物理、化学特征。它借鉴了荧光显微镜技术与血球计数原理,同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术发展,大大提升了检测速度与统计准确性,而且从同一个细胞中能够同时测得各种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新视角和强有力伎俩。

FCM在生命科学中应用,标志着细胞生物学、肿瘤学、免疫学等进入了细胞和分子水平研究。为从微观认识细胞及横向比较特征提供了精密、准确方法和仪器.

;EPICSXL流式细胞分析仪;FC500;惯用荧光染料特征;DualParameterHistograms;应用分类;免疫表型分析;生物学;;抗原分布:

Importantformethodoptimization;CD系列在免疫学中常被用于：;1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态

2.白血病/淋巴瘤免疫分型

3.HLA组织配型及HLA与一些疾病关系

4.干祖细胞定量及成份分析.

5.其它:血小板PAIg：粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及抑癌基因蛋白产物检测;细胞内酶;耐药蛋白分析等等。

;淋巴细胞亚群;淋巴细胞亚群;淋巴细胞亚群与疾病;监测细胞免疫状态

1.CD4+、CD8+T细胞降低：见于r免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺点病。

2.CD8+T细胞增多见于病毒感染：HBV、CMV、EB等。

3.CD4+/CD8+百分比异常：

进展期AIDS：CD4+细胞降低，CD8+细胞能够正常、增高或降低，比值下降；身免疫性疾病，如多发性硬化，CD4+/CD8+升高，CD8+降低；SLE病人淋巴细胞改变能够反应该病活动情况和器官侵犯程度。

ABMT后免疫重建期间可有CD4降低，比值下降。

风湿性关节炎关节液中CD4+CD29+细胞增多。

多发性硬化（MS）、SLE患者外周血CD4+CD45RA+细胞降低。;4，CD3/HLA-DR：同时计数外周血静止T细胞（CD3+HLA-DR-）、B细胞（CD3-HLA-DR+）及活化T细胞（CD3+HLA-DR+）。

5，CD3/CD16+56：计数总NK细胞群（CD3-CD[16+56]+）。

NK细胞是机体抗肿瘤、寄生虫、病毒等感染主要免疫原因，也参加第II型超敏反应和移植物抗宿主反应，IL-2治疗后，外周血NK细胞增加。

6，移植后免疫监测：

测定细胞表面活化抗原表示,能够预测移植排斥和移植后感染:

CD25+高于正常5--10%,表明即将发生或已发生排斥;

CD4/CD8比值下降提醒并发凶险感染,比值0.2必须停用免疫抑制剂.

CD2+HLA-DR+增加5--10%,且不伴有CD25增加,提醒巨细胞病毒感染.;变态反应性疾病;;;HLA-B27检测

外周血HLAB27表示及其表示程度与强直性脊柱炎发生有很大程度相关性.

循环血中活化血小板（CD62P、CD63）：

糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄患者活化血小板CD62p、CD63增多，能够用于预测PTCA后急性缺血再发作危险性。;PNH(阵发性睡眠性血红蛋白尿);HbF(胎儿血红蛋白)检测;HbF(胎儿血红蛋白)检测;热门研究;MHCTetramerTechnology;微转移肿瘤细胞;临床应用

疾病诊疗:为疾病诊疗提供直接或支持诊疗依据

免疫调整：细胞因子/受体相互作用

共刺激分子受体/配体相互作用

发病机理：肿瘤发病与机体免疫力低下、以及信号传递

障碍相关

药品/疫苗效果评价：肿瘤生物治疗时机选择、以及效果

监测

免疫状态评价：移植、放化疗等.

;细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2，M)各个时期，DNA含量随各时相展现出周期性改变。经过核酸染料标识DNA，并由流式细胞仪进行分析，能够得到细胞各个时期分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞周期分布及细胞增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki6