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核蛋白内参

我们知道，内参蛋白是指由管家基因（housekeepinggene）

编码表达的一类蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒

定，在实验中检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照

物。

这些内参蛋白常应用于WesternBlot中，WesternBlot不

仅能证明样品中是否含有某种蛋白，还能比较不同条件、不同

组织和细胞中目的蛋白的相对含量，从而衡量蛋白的表达水

平。内参蛋白作为一种参照物，在其中的作用为确定样本使用

量的一致性，以及校正实验过程中可能出现的操作误差，从而

进一步保证实验结果的准确性。那么对于不同的蛋白，内参蛋

白该如何选择呢？

前两节介绍了几种常见内参蛋白的选择和应用。本节将系统介

绍不同内参蛋白的选择以及云克隆公司现有的内参蛋白抗体。

对于内参蛋白的选择首先是考虑分子量。一般情况下，内参蛋

白和检测的目的蛋白最好相差在5kDa以上。如分子量为

45kDa的检测蛋白，我们可以选择TubulinBeta（54kDa），

LaminB1（66kDa）等，而不选择ACTa2（42kDa）或者beta-

actin（45kDa）。

其次对于不同的组织，应选择不同的内参。如肌动蛋白是一种

细胞骨架蛋白，有六种不同的亚型，包括：alpha-skeletal

muscleactin、alpha-cardiacmuscleactin、alpha-smooth

muscleactin、gamma-smoothmuscleactin、beta-actin

(β-non-muscle)和gamma-non-muscleactin。其中常用作

WesternBlot内参的beta-actin在肌肉和脂肪组织中分布

较少，那么若样本是心肌或脂肪组织来源的，就可以考虑分别

用alpha-cardiacmuscleactin(ACTC1)和GAPDH作为内

参蛋白。

最后，提取蛋白的部位不同，选择的内参蛋白也不同。比如有

时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时，就要选择相应部位

表达的内参蛋白。如PCNA在细胞核中高效稳定表达，理论上

在细胞质不表达，那么对于胞质提取的蛋白，就不能选用

PCNA作为内参蛋白，而应该选择细胞质中表达的Tublin

Beta、ActinBeta等作为内参蛋白。

云克隆针对不同细胞部位、不同组织、不同分子量的蛋白质

表达推出了一系列内参抗体，以满足用户的不同需求。见表

1。

表1.各种内参蛋白抗体

目标蛋

目标蛋目标蛋白

白的亚

货号1货号2目标蛋白白的分的组织表

细胞定

子量达部位

位

CAB932CAB932甘油醛-3-磷酸脱胞质，胰腺，乳

36kDa

Hu22Hu01氢酶(GAPDH)核，膜腺，胃