《皮肤致敏性整合测试与评估策略应用技术指南》 .doc

附件4

皮肤致敏性整合测试与评估策略应用技术指南

——“3选2试验”策略

中国食品药品检定研究院

目录

TOC\o1-3\h\z\u一、概述 -1-

二、适用范围 -2-

三、基本原则 -2-

四、可用的替代方法 -2-

五、注意事项 -4-

附录1 -5-

附录2 -7-

附录3 -8-

附录4 -9-

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一、概述

皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎Skinsensitization,allergiccontactdermatitis），是皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反应。皮肤变态反应试验是评价化妆品原料致敏性的常用方法，随着动物福利及科学技术的发展，国际上也逐步开展采用体外试验、非测试的毒性预测方法等多种毒理学评价工具组合的皮肤致敏性整合测试与评估策略，用于评价化妆品原料的潜在致敏风险。

目前科学上普遍认可皮肤过敏是以蛋白质共价结合为起始事件，经过细胞、组织器官等一系列生物学应答，最终导致过敏性接触性皮炎这一有害结局。皮肤致敏性整合测试与评估策略基于皮肤致敏有害结局路径（AdverseOutcomePathway，AOP）以及针对其中各关键事件（KeyEvents，KEs）研发的系列替代毒理学试验，整合待评估原料相关数据进行证据权重分析，对化妆品原料潜在的皮肤致敏性风险进行评价。

图1皮肤致敏AOP示意图

在皮肤致敏性AOP中，关键事件KE1为分子起始事件，关键事件KE2和KE3分别为角质形成细胞免疫应答和树突状细胞免疫应答，关键事件KE4为组织器官免疫应答反应（淋巴T细胞增殖）。

二、适用范围

本应用指南适用于化妆品原料皮肤致敏性评价。采用皮肤致敏性AOP检测关键事件KE1～KE3的毒理学试验方法组成“3选2试验”策略，其适用范围应符合所选所有试验方法适用性的要求。

三、基本原则

结合化妆品原料的特点，基于皮肤致敏AOP的机制，形成固定的逐步获取和评估检测数据的顺序测试策略，根据所获得的检测结果决定是否需要开展后续检测，可对化妆品原料皮肤致敏性进行危害识别。在策略中应说明覆盖了AOP中哪些关键事件、试验方法的选择顺序、对已知不确定性的考虑（如所选试验方法局限性、阳性结果判定的阈值边界范围等）内容。

四、可用的替代方法

目前，《化妆品安全技术规范》中用于检测皮肤致敏性的替代方法包括：皮肤变态反应：局部淋巴结试验（LLNA:DA和LLNA:BrdU-ELISA），体外皮肤变态反应试验：直接多肽反应试验（DPRA）、氨基酸衍生化反应试验方法（ADRA）、人细胞系活化试验（h-CLAT）、U937细胞激活试验方法（U-SENS）和角质细胞荧光素报告基因测试LuSens方法（LuSens）。

表1皮肤致敏性替代试验结果判定要求

关键事件

方法名称

结果判定要求

KE1

化妆品用化学原料体外皮肤变态反应：直接多肽反应试验（DPRA）

详见附录1

体外皮肤变态反应氨基酸衍生化反应试验方法（ADRA）

需说明结果判定及不确定分析

KE2

体外皮肤变态反应角质细胞荧光素报告基因测试LuSens方法（LuSens）

详见附录2

KE3

体外皮肤变态反应人细胞系活化试验（h-CLAT）

详见附录3

体外皮肤变态反应U937细胞激活试验（U-SENS）

需说明结果判定及不确定分析

KE4

皮肤变态反应：局部淋巴结试验：DA（LLNA:DA）

可得出受试物致敏能力和强度

皮肤变态反应：局部淋巴结试验：BrdU-ELISA（LLNA:BrdU-ELISA）

其中局部淋巴结试验（LLNA:DA和LLNA:BrdU-ELISA）用于检测KE4，试验结果能得出受试物的致敏能力和强度，这些结果可在有限的范围内外推到人类。

DPRA和ADRA试验用于检测KE1；LuSens试验用于检测KE2；h-CLAT和U-SENS试验用于检测KE3。“3选2试验”策略应从KE1～KE3中任意选择两个关键事件，分别选择对应的一项试验方法进行检测，如两个关键事件检测结论一致且试验结果均不在阈值边界范围内，则根据一致的结论判定化妆品原料是否具有皮肤致敏性；否则开展第三个关键事件的检测，根据三个关键事件检测结论中一致的两项结论判定化妆品原料是否具有皮肤致敏性；若三个关键事件检测结论存在矛盾（一项为阳性结果、一项为阴性结果、一项结果在阈值边界范围内）或其中两项以上检测结果均在阈值边界范围内，则判定无法确定皮肤致敏性风险。

五、注意事项

“3选2试验”策略的可靠性受组成策略的试验方法的适用性和局限性、原料理化性质等多种因素综合影响，预测结果存在一定的不确定性，需在评估过程中予以说明。例如，采