酶联免疫吸附测定法ELISA在.pptxVIP

酶联免疫吸附测定法（ELISA)在

抗生素残留检测中应用;药品残留快速检测试剂盒

试验操作指导;1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）介绍;2、ELISA试剂组成;2.2、各ELISA组成试剂作用;3、ELISA试验过程;4、ELISA试验质量控制;4.3、几个惯用质控方法;5、胶体金试纸

5.1、免疫层析法介绍及特点

5.2、免疫层析法结构及原理

二、培训内容（操作部分）

6、操作过程演示

7、计算软件应用说明;1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）介绍

1.1、基本概念：

抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，从而引发动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应物质。

抗体：是由抗原刺激动物免疫系统后，由免疫系统产生分泌能和对应抗原发生特异性结合免疫球蛋白。

抗原抗体基本特征：a、反应特异性；b、反应等百分比性

1.2、ELISA方法介绍：

ELISA属于标识免疫学技术一个，1971年由荷兰和瑞典学者提出，因为其操作过程简单易行并能够定量，从而使其在食品安全和卫生检测中得到了广泛应用。当前市场上有各种基于ELISA方法开发用于食品中抗生素检测试剂盒产品。

返回;1.3、ELISA方法原理

基于抗原抗体反应特异性和等百分比性，以96孔聚苯乙烯塑料微孔板（又称酶标板）为载体，在适当技术条件下使抗原或抗体包被（吸附）在酶标板微孔内壁上成为所谓包被（固相）抗体或抗原，没有被吸附（游离）抗原或抗体经过洗涤除去，然后直接加入酶标识抗体或抗原（或先加入适当抗体或抗原与包被抗原或抗体反应后，再加入对应酶标识抗体或抗原），形成酶标识抗原—抗体复合物固定在微孔内，没有吸附酶标识物洗涤去除，加入底物溶液于微孔中，复合物上酶催化底物使其水解、氧化或还原成为有色底物。在一定条件下，复合物上酶量（也反应了固定化抗原抗体复合物量）和酶产物展现色泽成正比，所以能够用分光光度计进行测定，从而计算出参加反应抗原和抗体量。这就是ELISA原理。

返回;1.4、ELISA方法分类

ELISA能够分为直接法、间接法和夹心法等几个。

直接法：

直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上抗体或抗原结合形成酶标抗原—抗体复合物，加入酶反应底物，测定产物吸光值，计算出包被在酶标上抗体或抗原量。见图2-17（a）

间接法：

是将酶标识在二抗上，当抗体（一抗）和包被在酶标板抗原结合形成复合后，再以酶标二抗和复合物结合，经过测定酶反应产物颜色能够（间接）反应一抗和抗原结合情况，进而计算出抗原或抗体量。见图2-17（b）

夹心法：

是先将未标识抗体包被在酶标板上，用于捕捉抗原，在用酶标抗体与抗原反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物；也能够象间接法一样应用酶标二抗和抗体-抗原-抗体复合物结合，形成抗体-抗原-抗体-酶标二抗复合物，见图2-17（C）。前者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。

返回;ELISA原理及分类（图2-17）;上述三种方法又能够分为竞争法和非竞争法。因为我企业试剂盒产品绝大部分属于直接法中竞争法。下面对直接法中酶标抗原竞争法作重点说明。

在进行测定时首先将包被了抗体酶标板微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中加入系列标准品溶液和酶标识物；在测定孔中同时加入酶标识物和非酶标抗原（通常来自于待测样品），酶标识物和样品相互竞争包被抗体结合点，经过温浴后，没有结合到包被抗体上酶标识物和样品经过洗涤去除。拍干后加入底物溶液，经温育后洗涤拍干，显色、终止，用酶标仪测定吸光度值。其反应原理如（图2-18）

返回;;竞争法ELISA原理简述;样本浓度计算;2、ELISA试剂组成

;2.2、ELISA试剂作用;2.3、酶标识物：

即酶标识