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附件2
化妆品防腐挑战测试
评估技术指南
中国食品药品检定研究院
目录
1.范围1
2.术语和定义1
3.设备和材料1
4.培养基和试剂2
5.测试菌株3
6.测试方法3
7.说明10
附录A11
1.范围
本指南规定了化妆品防腐效能的评价方法。
本指南适用于化妆品防腐体系效能评价。
2.术语和定义
2.1防腐效能评价试验
将一定量的微生物人工污染到化妆品中,模拟化妆品可能出
现的污染情况,每隔一定时间检测其中的存活菌量,根据存活菌
量的变化评价化妆品防腐体系效能的试验方法。
2.2中和剂
可添加至化妆品和微生物混和物中,消除化妆品中抑菌或杀
菌成分对微生物抑制或杀灭作用的试剂。
3.设备和材料
3.1A2型生物安全柜。
3.2高压蒸汽灭菌器。
3.3天平:感量为0.1g。
3.4恒温培养箱:36℃±1℃、28℃±2℃、25℃±2℃。
—1—
3.5均质器。
3.6无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)
或微量移液器及吸头。
3.7显微镜。
3.8酸度计。
3.9涡旋混匀器。
3.10灭菌平皿:直径90mm。
3.11无菌玻璃棉。
4.培养基和试剂
4.10.85%生理盐水。
4.2卵磷脂吐温80营养琼脂培养基,见附录A.1。
4.3虎红(孟加拉红)培养基,见附录A.2。
4.4含0.05%(v/v)聚山梨酯80的生理盐水,见附录A.3。
4.5胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA),见附录A.4。
4.6沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA),见附录A.5。
—2—
4.7SCDLP液体培养基,见附录A.6。
4.8EugonLT100肉汤,见附录A.7。
4.9D/E中和肉汤,见附录A.8。
4.10改良Letheen肉汤,见附录A.9。
5.测试菌株
5.1细菌
金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003
大肠埃希氏菌CMCC(B)44102
铜绿假单胞菌CMCC(B)10104
5.2真菌
黑曲霉CMCC(F)98003
白色念珠菌CMCC(F)98001
在进行化妆品防腐效能评价试验时,可根据需要增加其他相
关细菌或真菌作为测试菌株。
6.测试方法
6.1供试品微生物检测
—3—
取不少于2份包装完好的供试化妆品样品,依据《化妆品安
全技术规范》第五章微生物检验方法中微生物检验方法总则、菌
落总数、霉菌和酵母菌检验方法对样品进行检测,检测结果应符
合《化妆品安全技术规范》中的限值规定。供试品微生物检测的
结果记作N。
f
6.2微生物悬液制备
6.2.1细菌悬液制备
用接种环从菌种保存管中(或试管斜面上)取适量菌体,分
区划线接种于TSA平板,36℃±1℃培养18h~24h。用接种环取
第1代培养物,分区划线接种于TSA平板,36℃±1℃培养18h~24
h。挑取上述第2代培养物中典型菌落,分区划线接种于TSA平
板,36℃±1℃培养18h~24h,即为第3代培养物。用无菌棉签
取菌苔加入无菌生理盐水中,涡旋混匀。用无菌生理盐水将其稀
78
释成约10
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