2023年版中国药典微生物限度检查方法验证方案.docx

2023年版中国药典微生物限度检查方法验证方案

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

概述

验证目的和范围3.组织及职责4.验证进度打算表

验证所需要的仪器设备及相关文件确实认6.验证所需要的菌种、培育基、检验样品确实认7.验证工程和验证方法7.1试验菌株

7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法7.5把握菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项把握9.验证报告会审

1.概述

我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查工程为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》2023版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：把握菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方

法予以验证。通过验证以确认所承受的微生物限度检查方法适用。

人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶，可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。

本验证方案依据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进展试验，依据验证结果推断是否符合验证标准。2.验证目的和范围

验证该产品的微生物限度检查方法的适用性，对其有效性进展评价，保证检验结果的牢靠性。本验证方案承受3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进展微生物限度检查方法的验证。3.组织及职责

3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准

验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总微生物限度检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2验证方案的培训

验证方案在经质量负责人批准后，，由QC组组长对本次验证明施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。

3.3验证方案实施过程中的变更和偏差

验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进展评估并实行相应的把握措施。3.4验证工作小组成员表

4.验证进度打算表

本次微生物限度检查方法验证的打算安排时间是2023年12月至2023年1月。5.验证所需要的仪器设备及相关文件确实认

主要检验仪器设备确认表

检查人/日期：复核人/日期：5.2.验证所需文件确实认表

检查人/日期：复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培育基、检验样品确实认6.1.试验菌种检查表

6.3.检验样品确认表

检查人/日期：复核人/日期：7.验证工程和验证方法7.1试验菌株

人工牛黄甲硝唑胶囊需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证所用的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；把握菌检查方法验证所用的菌株为大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌。试验菌株的传代次数不得超过5代，并承受适宜的菌种保藏技术进展保存，以保证试验菌株的生物学特性。

7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备

分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的颖培育物至10ml胰酪大豆胨液体培育基中，30～35℃培育18～24小时，取此培育液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，承受10倍递增稀释法，稀释至10～10,制成50～100cfu/ml的菌悬液备用。

接种白色念珠菌的颖培育物至10ml沙氏葡萄糖液体培育基中，20～25℃培育2～3天，取此培育液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，承受10倍递增稀释法，稀释至10～10，制成50～100cfu/ml的菌悬液备用。

接种黑曲霉的颖培育物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20～25℃培育5～7天，直到获得丰富的孢子。参与3～5ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸至无菌试

管中，取1ml加含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液9ml，承受10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成50～100cfu/m的孢子悬液备用。

菌液制备后假设在室温下放置，应在2小时内使用；假设保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子