食品大肠菌群的测定平板计数法.pptxVIP

大肠菌群计数食品大肠菌群的测定平板计数法第1页

1:101ml1ml1:10001:1001ml1:10000加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。VRBA主要成份乳糖、胆盐、结晶紫、中性红及细菌生长所必需营养成份如:蛋白胨、酵母膏等。结晶紫和中性红为VRBA指示剂系统，在酸性条件下为紫红色。大肠菌群分解乳糖所产生酸与胆盐结合，可形成沉淀。25g或ml样品1ml生理盐水1ml1ml1ml经典菌落为紫红色,菌落周围有红色胆盐沉淀环。菌落直径为0.5mm或更大。挑选菌落接种BGLB食品大肠菌群的测定平板计数法第2页

实践操作任务一仪器试剂准备任务二仪器试剂灭菌食品大肠菌群的测定平板计数法第3页

任务三样品稀释制备⑴检样处理以无菌操作取经过充分摇匀检样25mL，放入含有225mL灭菌生理盐水灭菌广口瓶内做成1:10均匀稀释液。⑵样品稀释用1mL灭菌吸管,吸收1:10稀释液1mL,沿管壁渐渐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使之混合均匀,制备成1:100稀释液。另取1mL灭菌吸管,按上项操作次序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL灭菌吸管。全过程遵照无菌操作程序，考虑怎样满足要求？食品大肠菌群的测定平板计数法第4页

任务四平板制备选择适宜稀释样液依据对标本情况预计,选择3个适宜稀释度,吸收该稀释度1mL稀释液于灭菌平皿内。待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作侵入无菌培养皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，利用培养基冲散菌液，混匀。冷却凝固后，再在表面加3-4mL培养基。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。食品大肠菌群的测定平板计数法第5页

任务五经典和可疑菌落计数选择菌落数在15~150之间平板，分别计数平板上出现经典和可疑大肠菌群菌落。经典菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。食品大肠菌群的测定平板计数法第6页

任务六证实试验从VRBA平板上挑取10个不一样类型经典和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。BGLB肉汤管产气者，所对应菌落即为大肠菌群阳性菌落。食品大肠菌群的测定平板计数法第7页

任务七结果汇报经最终证实为大肠菌群阳性BGLB管百分比乘以计数平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个经典和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为：100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)食品大肠菌群的测定平板计数法第8页

注意事项1、选择稀释度时，应以对含菌量预计为依据，详细情况所选稀释度不一样。2、两种检测方法比较食品大肠菌群的测定平板计数法第9页

平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更准确。适适用于污染比较严重样品，但对于污染菌量太少样品，还是MPN法更有优势。食品大肠菌群的测定平板计数法第10页