小标本和细胞学标本的基因检测病理科专家讲座.pptx

小标本和细胞学标本基因检测上海市胸科医院病理科小标本和细胞学标本的基因检测病理科第1页

内容介绍小标本和细胞学标本获取标本病理学评定检测方法选择EGFR突变检测应用小标本和细胞学标本的基因检测病理科第2页

小标本和细胞学标本获取小标本和细胞学标本的基因检测病理科第3页

内科多伎俩获取肺癌标本无创痰脱落细胞细针活检支气管镜：TBLB，TBNA，EBUS-TBNACT引导活检术有创纵隔镜胸腔镜病理诊疗+基因检测小标本和细胞学标本的基因检测病理科第4页

支气管镜活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理提议采取灵敏度高检测方法小标本和细胞学标本的基因检测病理科第5页

细针穿刺活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理提议采取灵敏度高检测方法小标本和细胞学标本的基因检测病理科第6页

细胞学标本细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少，需要采取灵敏度高检测方法利用染色后细胞涂片直接刮片，提取DNA，用于基因检测制备细胞蜡块：处理流程：细胞学标本经离心处理后，常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋制备细胞蜡块好处：（1）便于长久保留；（2）方便用于EGFR基因突变检测及其它分子生物学标识物检测胸水或支气管刷片涂片、染色病理诊疗液基细胞学病理诊疗细胞蜡块，切片染色病理诊疗小标本和细胞学标本的基因检测病理科第7页

病理组织学诊疗：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌肿瘤量：确保有足够肿瘤组织用于突变检测尽可能确保200-400个肿瘤细胞能够尝试进行200个肿瘤细胞标本检测5uM10张切片能满足突变检测需求当细胞数较少时,能够适当增加切片数肿瘤百分比：普通要求肿瘤百分比20%，不然，需要标识肿瘤丰富区域，提升肿瘤细胞百分比尽可能去除非肿瘤组织及细胞，提升检测敏感性不一样敏感性检测方法对肿瘤百分比要求不一样标本病理评定小标本和细胞学标本的基因检测病理科第8页

小标本和细胞学标本EGFR突变检测小标本和细胞学标本的基因检测病理科第9页

肿瘤组织异质性遗传异质性正常细胞混杂小标本和细胞学标本的基因检测病理科第10页

检测方法比较ME-PCR/SequencingO=Transferproduct/addreagent/opentubePCR:

Real-time

DetectionPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingPCRPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingPCRHetero-

duplexCapillaryElectro-phoresisARMSPNA-LNAclampPCR/SequencingNestedPCR/SequencingPCR/

HRMA/

dHPLCPCR/

RFLPPCRRFLPElectro-phoresisSizingPCRPCRClean-upSequencingRxnCapillarySequencingRFLPOOOOOOOOOOOOTaqManClean-upOClean-upOClean-upOOOOPCRSURVEYORcleavagedHPLCSizingOConfirmationbysequencingPCR/

SURVEYORPCRClean-upPyro-sequencingRxnPyroSequencingOO123456Steps7ConfirmationbysequencingOConfirmationbysequencingOOO1%~10%3-10%10%3-12%20~30%20~30%PCR:

Real-time

Detection~10%1%小标本和细胞学标本的基因检测病理科第11页

1.FHirsch,etal.JCO；2.CZhu,etal.JCO3.TMok,etal.DiscoveryMedISELBiomarker测序法阴性样本（～200）ARMS法重新检测17(+)测序法复测7(+)BR21后续分析测序法阴性样本（n=148）ARMS法重新检测11(+)测序法与ARMS法应用小标本和细胞学标本的基因检测病理科第12页

测序法与ARMS法应用实例-2JClinOncol.,20;29:3316-3321.ARMS法比测序法更灵敏，灵敏度为1%小标本和细胞学标本的基因检测病理科第13页

国际肺癌协会教授共识小标本和细胞学标本的基因检测病理科第14页

小标本和细胞学标本EGFR突变检测应用小标本和细胞学标本的基因检测病理科第15页

支气管刮取物样本检测肿瘤EGFR突变BritishJournalofCancer,,95:1070-1075支