04第四章-灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学).pptVIP

灭活剂、保护剂和免疫佐剂第四章内容提要第一节灭活与灭活剂一、灭活的概念二、常用的灭活剂三、影响灭活作用的因素第二节冻干保护剂一、保护剂的组成与功用二、影响冻干保护剂效能的因素三、常用的冻干保护剂第三节免疫佐剂一、佐剂概述二、不溶性盐类胶体佐剂三、油乳佐剂第一节灭活与灭活剂一、灭活的概念这里所讲的灭活是指微生物的灭活，即破坏微生物的生物学活性，破坏病原微生物的繁殖能力及致病性，并且尽可能不影响或少影响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。灭活的方法包括物理学方法和化学方法，其中物理学方法有加热及射线照射等方法。该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗率，容易造成蛋白质变性，明显影响微生物的免疫原性，所以这种灭活方法已基本淘汰。目前多用化学方法进行微生物的灭活，用来灭活的化学试剂或药物等称为灭活剂(inactivator)。化学灭活剂灭活是制备灭活苗最重要的手段，化学灭活剂的灭活效能与使用剂量、灭活时间、灭活时的温度及溶液的pH等都与灭活苗的质量密切相关。二、常用的灭活剂(一)甲醛甲醛是最古典和应用最广的灭活剂。早在1911年，Lowenstein和Eisler用甲醛处理破伤风毒素，使之脱毒而成类毒素。1924年Puntoni以0.1%甲醛制成犬瘟热疫苗，1925年，Casta、Boyer和Placidi等用甲醛灭活制备猪丹毒菌苗。甲醛为无色气体，易溶于水和乙醇，水溶液称为福尔马林，通常浓度为36%-40%，有强烈的刺激性。长期低温或受冻保存，可以聚合而成三聚甲醛或多聚甲醛。农牧渔业部1984年发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中20种灭活苗，以甲醛灭活者达17种，占85%。作用于蛋白质的氨基产生羟甲基胺；作用于羧基形成亚甲基二醇单酯，作用于羟基生成羟甲基酚；作用于巯基生成硫代亚甲基二醇。还可引起细菌蛋白中氨基与羟基发生分子内交联。甲醛还可与RNA碱基中的游离氨基特异性结合；甲醛与核糖体中的氨基结合，使两个亚单位间形成交联链。甲醛的作用原理所有这些交联使微生物结构有轻微改变，失去活性，但不明显影响其免疫原性。甲醛的灭活作用主要是甲醛的醛基作用于微生物蛋白质。甲醛用于病毒灭活其浓度可在0.05%~0.4%范围内，大部分使用浓度为0.2%~0.3%。一般需氧细菌用0.1%~0.2%的浓度。厌氧菌则多用0.4%~0.5%杀菌或脱毒，处理时间37~39?C24h以上，有的需要更长时间。例如猪肺疫灭活苗，用0.1%的甲醛溶液，在37~38?C条件下灭活7~12h；气肿疽灭活苗，用0.5%的甲醛液，37-38?C灭活72~96h；破伤风类毒素用0.4%甲醛液，在37~38?C条件下灭活21~23天。甲醛的使用浓度注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！(二)苯酚酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)，又称石炭酸(acidumcarbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解，溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深，所以应避光保存。酚类化合物的抗菌作用是通过损害细菌细胞膜，使胞浆漏出，并使菌体溶解；可使菌体蛋白质凝固，抑制细菌特异酶系统(如脱氢酶和氧化酶)活性。苯酚在0.2%浓度时，即可抑制一般细菌的生长，而杀菌则需要1%以上的浓度，如杀死葡萄球菌和链球菌需要3%的浓度作用1-3min，芽胞和病毒对苯酚的耐受性很强。(三)结晶紫结晶紫是一种碱性染料，为甲基紫的纯品，化学名为六甲基副玫瑰苯胺。结晶紫的灭活机制主要是：它的阳离子与微生物蛋白质带阴电的羧基形成弱电离化合物，妨碍了微生物的正常代谢，扰乱微生物的氧化还原作用。干扰胞壁粘肽的合成，主要是对革兰氏阳性菌。(四)烷化剂烷化剂（alkylatingagent）是含有烷基的分子去掉一个氢原子基团的化合物，它能与另一种化合物作用，将烷基引入，形成烷基取代物。这类烷化剂包括：二乙烯亚胺（binaryethylenimine，BEI）、N-乙酚乙烯亚胺(N-Acetylethylenimine，AEI)、2-乙基乙烯亚胺(2-ethylen-thylenimin