基因工程的基本操作程序公开课专业知识专家讲座.pptx

基因工程的基本操作程序;;基因工程基本操作程序;一、目标基因获取;（一）从基因文库中获取目标基因;基因组DNA文库;;①不能转录为信使RNA，不能

编码蛋白质。;;真核细胞基因结构;;;基因表示计算;基因组文库与部分基因文库关系;基因组文库和部分基因文库比较;概念辨析;基因组文库构建模式图;2.基因文库构建方法;（1）鸟枪法：;以目标基因转录成信使RNA为模板，再反转录酶催化下反转录成互补单链DNA，然后在DNA聚合酶作用下合成双链DNA，即cDNA，从而取得所需基因。

;（3）依据已知氨基酸序列合成DNA法：;上述三种目标基因提取方法有何优缺点？;思索：

怎样从基因文库中得到所需要基因？;（二）利用PCR技术扩增目标基因;;模板DNA;;;;;;基因工程的基本操作程序公开课专业知识专家讲座;①概念：PCR全称为_______________，是一项

在生物____复制___________核酸合成技术。;过程：;⑥过程：;思索？;模板DNA

特异性引物

耐热DNA聚合酶

dNTPs

Mg2+;PCR基本反应步骤;TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus);基因工程的基本操作程序公开课专业知识专家讲座;PCR技术扩增与DNA复制比较;;依据已知蛋白质氨基酸序列，推测出对应mRNA序列，然后按照碱基互补配对标准，推测出它结构基因核苷酸序列，再经过化学方法，以单核苷酸为原料合成目标基因。;人工合成;从基因文库中获取

利用PCR技术扩增

利用化学方法人工合成;用一定_________切割

质粒，使其出现一个切

口，露出____________。

用_____________切断目

基因，使其产生_____

____________。;;2.基因表示载体目标

（1）使目标基因在受体细胞中稳定存在并能够遗传给下一代；

（2）使目标基因能够表示和发挥作用。

;科学家在培育抗虫棉时，经历了屡次失败，才取得成功。

起初把苏云金芽孢杆菌抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表示。

然后在插入抗虫基因质粒中插入开启子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有开启子、抗虫基因质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长植株，有了抗虫能力。;思索：作为基因工程表示载体，只需含有目标基因就能够完成任务吗？为何？（P15）;（1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物本身基因开启子才能比较有利于基因表示；;3.基因表示载体组成：;;思索1：

表示载体为何一定要有开启子？;思索2：终止子作用是什么？

终止子是位于基因尾端一段特殊DNA片断，能终止mRNA转录。;①载体与表示载体区分：二者都有标识基因和复制原点两部分DNA片段。表示载体在载体基础上增加了目标基因、开启子、终止子三部分结构。;基因工程技术路线;三、将目标基因导入受体细胞;（二）方法;1.将目标基因导入植物细胞;（1）农杆菌转化法;③转化过程:;基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生动力，将包裹在金属颗粒表面表示载体DNA打入受体细胞中，使目标基因与其整合并表示方法。;（3）花粉通道法;胚珠;2.将目标基因导入动物细胞;（2）操作程序:;惯使用方法：Ca2+处理;受体生物;四、目标基因检测与判定;1、检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目标基因;基因探针：是一段带有检测标识，且序列已知，与目标基因互补核酸序列。

基因探针经过分子杂交与目标基因结合，产生杂交信号，能从浩翰基因组中把目标基因显示出来。;DNA分子杂交示意图;（二）判定（个体生物学水平）;;若不能表示，要反抗虫基因再进行修饰。;类型;提醒：

①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中DNA，然后高温解成单链，再与同位素标识DNA探针杂交；

②抗原－抗体杂交所用到抗体是用表示出蛋白质注射动物进行免疫，产生对应抗体，并提取出而来。;基因工程的基本操作程序公开课专业知识专家讲座;归纳:基因工程基本操作程序;为何要构建基因文库？直接从含有目标基因生物体内提取不行吗？;利用大肠杆菌能够生产出人胰岛素，联络前面相关细胞器功效知识，结合基因工程操作程序基本思绪，思索一下，若要生产人糖蛋白，能够用大肠杆菌吗？;依据农杆菌可将目标基因导入双子叶植物机理,你能分析出农杆菌不能将目标基因不能导入单子叶植物原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做?;4.β-珠蛋白是动物血红蛋白主要组成成份。当它成份异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细