电镜标本处置专家讲座.pptx

免疫染色后标本处理;免疫电镜技术;Protocolforimmunohistochemistry;免疫组织化学技术与电镜技术矛盾点:

免疫组织化学:破坏细胞膜增强抗体穿透性,最大程度地标识抗原！

电镜技术：最大程度地固定保留细胞膜性结构，使细胞超微结构清楚美观。

二者矛盾结合点：

既良好地标识了抗原又完美地保留了膜性结构;免疫电镜技术基本流程;免疫染色后标本处理;光镜电镜;振动切片机;;8将切片裱于蛋清涂布载玻片上，充分晾干。入0.1mol/LPB。漂洗5min×3次。

9在湿盒和通风厨中，每张切片加于2%锇酸60～80μl。固定1.5～2h。漂洗5min×4次。

10经50%、70%、80%、90%、100%（3次）各级酒精脱水，每级10min。

11在切片表面注入少许Epon/丙酮液（Epon：丙酮=2：1），用注满Epon液塑料胶囊扣入切片上。

12置聚合箱中，37℃聚合24h，60℃聚合48h。

13在酒精灯外燃上加热5～7秒，将标本从载片上分离，剥除塑料胶囊。镜下选择超薄切片部位或细胞。

14修块，用超薄切片机切片，片厚60～80nm。将切片裱于铜网。

15醋酸铀、枸橼酸铅染色，双蒸水洗净，电镜观察。;锇酸固定

锇酸配制与管理：用0.1MPB配制，浓度为2%。用棕色磨口瓶密封，4度冰箱内保留。

固定时间：1.5～2h

注意事项：在通风橱中进行。

;脱水;包埋

Epon树脂配置器具：50～100ml塑料水杯或对应大小烧杯；5～10ml塑料注射器；1ml注射器；医用手套；Epon套剂（4种）。Epon配方与配量：

EponDDSAMNADMP-30Total（ml）

23.816.011.50.852.1

11.90.85.750.426.05

配制：依据上配方，用注射器取Epon加入杯中，置搅拌器上用磁棒旋转搅拌，依次加入DDSA，NMA，最终加入DMP-30，用膜封住杯口免湿气侵入，继续搅拌30min。;树脂包埋;取块与修块;超薄切片;切片刀;电镜观察;实验：

分组：2个组（10人/组）

试验内容：

1、灌注、取材。

带教老师：孙燕

地点：9号214室

2、切片示教。

带教老师：高璐、朱新平、李瑞锡

地点：9号楼二楼和三楼

时间：8号、10号（二、四）中午12：00～13：20;??交课程汇报

内容：1）《实用免疫电镜技术》基本步骤

2）个人学习主要收获

3）对课程意见和提议

时间：12月15号（星期二）;《组织化学和细胞化学》

硕士国家统编教材

主编：蔡文琴;组织化学与细胞化学

硕士国家统编教材

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第一章组织制片技术与细胞化学技术（北京中医药大学郭顺根）5.0万字

第一节组织制片技术

取材与固定

石蜡切片包埋程序

惯用染料和染色方法

树脂包埋光镜切片技术

冰冻切片染色技术

整封制片技术

第二节惯用组织化学染色方法

糖原染色方法

核酸染色方法

酶组织化学染色方法

细胞凋亡检测技术

第二章免疫细胞化学技术9..0万每节15万字左右

第一节免疫细胞化学免疫学及组织细胞学概述(三军医大学张吉强)

抗原

抗体

补体系统

标识物

抗体制备和配制

组织材料处理（取材）

细胞和组织固定

组织切片技术

免疫染色

对照设置

第二节免疫荧光细胞化学技术

免疫荧光细胞化学原理

荧光抗体

荧光免疫细胞化学染色方法（内容上含有对照试验）

第三节酶免疫细胞化学技术

酶标抗体法

非标识抗体酶法

结果分析

免疫组织化学几个特殊应用

第四节亲和免疫细胞化学技术(三军医大学蔡文琴)

生物素-抗生素免疫细胞化学技术

葡萄球菌蛋白A

凝集素

第五节免疫金银及铁标识技术(三军医大学蔡文琴)

免疫进技术发展史

溶胶基本概念

免疫胶体金银细胞化学染色固定剂选择

光镜免疫金银细胞化学技术

附录免疫细胞化学惯用试剂介绍

;第三章原位杂交组织化学技术5.0万

第一节原位杂交组织化学技术基本原理

基本原理

基本方法

第二节核酸探针种类、制备及标识

特异性目标核酸（或基因）制备

目标核酸扩增

核酸探针放射性