核酸扩增检测实验室设计及工作流专家讲座.pptx

核酸扩增检测试验室设计及工作流程

李金明卫生部临床检验中心

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核酸扩增检测试验室设计

依据：卫生部颁发《临床基因扩增检验试验室管理暂行方法》（卫医发[]10号）

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血液标本接收

通常工作流程：标本采集血清分离

编号保留或检测

应在四个测定区域之外地方或区域内接收

接收标本应搜集在原始容器中

在核酸提取时带入至标本制备区

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标本接收区仪器设备要求

假如在标本接收区分离血清（浆）标本，有1台分离血清（浆）用离心机、1台生物安全柜、1台冰箱、加样器及对应一次性经高压处理消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号统计本以及记号笔等即可。

假如不在标本接收区分离血清（浆）标本，只是简单接收，则就不需要分离血清（浆）用离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。

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理想核酸扩增试验室设计A

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理想核酸扩增试验室设计B

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核酸扩增检测试验室设计普通标准

各区独立

注意风向

因地制宜

方便工作

“十六字口诀”

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A

B

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传递窗

传递窗

传递窗

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关于“区域”合并

如使用扩增和产物分析同时完成实时荧光PCR仪进行核酸扩增检测，扩增区和产物分析区能够合并。

如使用核酸提取、扩增及产物分析等均在一台仪器上完成全自动核酸检测分析仪，标本制备区、扩增区和产物分析区可合并。

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无“基因”或“核酸”概念主要性

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符合基本要求核酸扩增检测试验室条件

（1）试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三个或四个区域在物理空间上，必须是完全相互独立，各区域不论是在空间还是在使用中，应一直处于完全分隔状态，不能有空气直接相通。

（2）各区可移动仪器设备及各种物品包含试验统计本、记号笔、试管架及清洁用具等必须专用。

（3）应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能出现“污染物”区域安装排风扇或其它排风和有效装置，以使空气按试剂准备区标本制备区扩增（及产物分析）区方向流动。

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核酸扩增试验室工作流程

试剂准备区

标本制备区

扩增区及扩增产物分析区

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试剂准备区

核酸扩增试验室中最为“洁净”区域，不应有任何核酸存在，包含试剂中所带标准品和阳性对照。

全部试验用洁净物品如离心管、吸头等存放和准备处。

商品试剂盒：75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、有机溶剂等可能需要自配

自制试剂：一次较大量配制，然后分装成小瓶保留，每次检测时，取出一小瓶使用，未用完即弃掉，不再使用。

仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等，最好配置超净工作台。

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标本制备区

仪器设备主要有混样设备、核酸提取仪、生物安全柜、加样器、高速台式（冷冻）离心机、加热模块或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不应放在试验室门口等易受人员走动影响地方，也不应直对分体式空调。

主要是用于血液样本混样、核酸样本提取。

加样器吸头必须带滤芯。

使用加热模块时，如在模块孔中填入二氧化硅细砂，然后将标本管置于细砂中温育，可得到较为一致温育温度。

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扩增及产物分析区

扩增反应体系配制和提取核酸加入，可在标本制备区也可在本区内进行，关键是要预防产物污染。假如空间允许话，也可在一个独立区域内进行。

加样时，先加提取核酸模板样本，每加完一个即盖好盖子，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释主反应混合液扩增阴性质控，这么做目标是，最大可能地测出以前扩增产物交叉污染。

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扩增及产物分析区

热循环仪电源应专用，并配置一个不间断电源（UPS）或稳压电源。

每次扩增后，可使用可移动紫外灯对扩增热循环仪进行照射。

扩增仪应定时进行校准。

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