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乳酸菌菌种的分离筛选方法解读
第一篇:乳酸菌菌种的分离筛选方法解读
乳酸菌菌种的分离筛选方法
乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性
厌氧菌,杆状或球状,革兰氏阳性菌,无芽孢,不运动。营养要求高,
需要提供富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白
色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物
乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、
戊糖片球菌等。乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是
复杂区系中的部分菌类时,SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽
孢乳杆菌常用GYP培养基,链球菌有YC培养基、MS培养基。M17
培养基被用作乳球菌的分离培养基。嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个
种。其特性为:杆菌,两端圆,不运动,无鞭毛。粪肠球菌为革兰氏
阳性,圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状,直径0.6~1.0μm,在直角两个平面交替
形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏
阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜
穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落,不易观察,所以分离
时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵
母膏、吐温-80等物质,也常常加入醋酸盐,因醋酸盐能抑制部分细菌
生长,对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙,乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈,
作为分离鉴别的依据,通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸,维生素及微氧,一般菌落比
较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质,均具有
促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长,对乳酸菌无
害。一.筛选方法:1.溶钙圈法:
利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈,
从而筛选出这些产酸类细菌,可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3的作用是:①鉴别能产生酸的细菌;②
中和产生的酸,以维持培养基的PH。
筛选过程:样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂
布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线
→挑起单菌落染色,经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试
管穿刺4℃冰箱保存。2.溴甲酚绿指示剂法:
培养基:MRS培养基(含溴甲酚绿酒精溶液)
筛选过程:同上,不同之处是稀释涂布后长出菌落,挑取使溴甲
酚绿变色的菌落。
二.菌种的分离筛选1.培养基:
★1.1麦芽汁碳酸钙培养基:麦芽汁(10BX)1L预先灭菌碳酸钙
5-10g/LPH自然(分离用)
★★1.2牛肉膏10g/L蛋白胨10g/L酵母膏10g/L番茄汁200g/L
葡萄糖10g/L吐温0.05%CaCO315-20g/L溴甲酚绿0.01%PH6.0-
6.5(分离用)★1.3番茄汁碳酸钙培养基:酵母膏7.5g/L葡萄糖10
g/L番茄汁100mL蛋白胨7.5g/LKH2PO42.0g/L吐温0.5mLPH
6.0-6.5(分离用)1.4葡萄糖20g/L酵母膏10g/LPH6.0-6.51.5蛋
白胨8-10g/L酵母膏3-5g/L葡萄糖13-15g/LKH2PO41.5-2.0g/L
MgSO40.3-0.5g/LMnSO40.2-0.25g/LNaAC3.0-5.0g/LPH5.5-
6.51.6蛋白胨0.8-1.0g/L糖蜜3.0-5.0g/L酵母膏3-5g/L玉米浆0.5-
1.0g/LKH2PO40.1-0.3g/LMgSO40.3-0.5g/LNaC13-5g/L葡萄糖
8-10g/LPH5.5-6.5(发酵或种子培养基)★★1.7MRS培养基(分离
培养计数用)
蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、
葡萄糖20.0g、吐温801.0mL、乙酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫
酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、
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