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基于核酸和蛋白的蚊媒病毒特异性检测方法的建立2024-01-14汇报人：

引言蚊媒病毒概述基于核酸的蚊媒病毒特异性检测方法基于蛋白的蚊媒病毒特异性检测方法特异性检测方法的性能评价与比较结论与展望contents目录

CHAPTER引言01

研究背景与意义蚊媒病毒传播危害蚊媒病毒可引起登革热、寨卡病毒病等多种严重疾病，对全球公共卫生安全构成威胁。特异性检测需求针对蚊媒病毒的特异性检测是预防和控制病毒传播的关键环节。核酸和蛋白检测优势基于核酸和蛋白的检测方法具有高灵敏度和特异性，可用于蚊媒病毒的早期诊断和监测。

实时荧光定量PCR、数字PCR等核酸检测技术已广泛应用于蚊媒病毒检测。核酸检测方法酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析等蛋白检测技术可用于蚊媒病毒抗原和抗体的检测。蛋白检测方法随着生物技术的不断发展，新型核酸和蛋白检测技术不断涌现，为蚊媒病毒特异性检测提供了更多选择。发展趋势国内外研究现状及发展趋势

研究目的和内容研究目的建立基于核酸和蛋白的蚊媒病毒特异性检测方法，提高病毒检测的准确性和效率。核酸提取与纯化从蚊虫样本中提取病毒核酸，并进行纯化处理。核酸检测方法建立利用实时荧光定量PCR等技术，建立针对蚊媒病毒的核酸检测方法。蛋白提取与纯化从蚊虫样本中提取病毒蛋白，并进行纯化处理。蛋白检测方法建立利用酶联免疫吸附试验等技术，建立针对蚊媒病毒的蛋白检测方法。方法验证与应用对所建立的核酸和蛋白检测方法进行验证，评估其准确性和可靠性，并应用于实际样本的检测。

CHAPTER蚊媒病毒概述02

登革热病毒黄热病病毒基孔肯雅病毒寨卡病毒蚊媒病毒种类与传播途径通过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播，引起登革热和登革出血热。通过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播，引起基孔肯雅热。通过非洲伊蚊和亚洲虎蚊叮咬传播，导致黄热病。主要通过埃及伊蚊叮咬传播，导致寨卡病毒感染。

蚊媒病毒可引起严重的人类疾病，如登革热、黄热病、基孔肯雅热和寨卡病毒感染等，具有高发病率和死亡率。目前主要采取灭蚊措施和疫苗接种来预防和控制蚊媒病毒的传播，但存在效果不稳定、疫苗接种覆盖率不足等问题。蚊媒病毒危害及防治现状防治现状危害程度

评估防治效果特异性检测可用于评估灭蚊措施和疫苗接种等防治手段的效果，指导后续工作。预警预测结合特异性检测结果和气象、环境等因素，可以建立预警预测模型，提前预测蚊媒病毒的传播风险。监测病毒传播通过特异性检测方法，可以实时监测蚊媒病毒的传播情况，为防治工作提供科学依据。特异性检测在蚊媒病毒防治中的应用

CHAPTER基于核酸的蚊媒病毒特异性检测方法03

核酸提取从蚊媒样本中提取病毒核酸，常用方法包括酚-氯仿法、硅胶膜法、磁珠法等。这些方法的选择取决于样本类型、病毒种类以及实验室条件。核酸纯化去除提取液中的杂质和抑制剂，提高核酸的纯度和浓度。纯化方法包括乙醇沉淀、硅胶柱层析、磁珠分离等。核酸提取与纯化技术

PCR技术利用特异性引物对目标核酸片段进行扩增，通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR仪对扩增产物进行检测。PCR技术具有高灵敏度、高特异性和可定量的优点。等温扩增技术在等温条件下进行核酸扩增，不需要PCR仪。常用方法包括LAMP、RPA等，具有快速、简便的特点，适用于现场快速检测。核酸扩增技术

将病毒核酸固定在固相支持物上，与特异性标记的探针进行杂交，通过检测杂交信号来确定病毒的存在。该方法具有较高的特异性和灵敏度。Southern杂交用于检测RNA病毒，原理与Southern杂交相似，但需要将RNA逆转录成cDNA后再进行杂交。Northern杂交核酸杂交技术

TaqMan探针法利用特异性TaqMan探针在PCR扩增过程中释放荧光信号，实时监测扩增产物的生成。该方法具有高灵敏度、高特异性和可定量的优点，适用于病毒载量的准确测定。SYBRGreen法利用SYBRGreen染料与双链DNA结合后发出荧光信号的特性，实时监测PCR扩增过程。该方法具有简便、经济的优点，但特异性相对较低，需要通过熔解曲线分析等方法排除非特异性扩增产物的影响。实时荧光定量PCR技术在蚊媒病毒检测中的应用

CHAPTER基于蛋白的蚊媒病毒特异性检测方法04

抗原制备与纯化技术重组蛋白表达技术利用基因工程技术将病毒蛋白基因克隆到表达载体中，通过宿主细胞表达系统生产出重组蛋白。蛋白纯化技术通过层析、电泳等方法将表达的重组蛋白从宿主细胞蛋白中分离纯化，获得高纯度的病毒抗原。

通过免疫动物获得多克隆抗体，用于病毒蛋白的检测和鉴定。多克隆抗体技术通过细胞融合技术获得针对病毒蛋白特定表位的单克隆抗体，提高检测的特异性和灵敏度。单克隆抗体技术抗体制备技术

VS将特异性抗体固定在试纸条上，通过样本中的病毒蛋白与抗体的结合实现快速检测。胶体金免疫层析技术利用胶体金颗粒作为标记物，结合免疫层析技术实现病毒