猪伪狂犬病毒gB蛋白磁微粒化学发光抗体检测方法.pdf

猪伪狂犬病病毒gB蛋白磁微粒化学发光抗体检测方法

1范围

本文件规定了猪伪狂犬病病毒gB蛋白磁微粒化学发光抗体检测方法的试剂与仪器耗材、技术原理、

操作步骤、试验成立条件、结果计算及判定标准等内容。

本文件适用于猪血清中伪狂犬病毒gB抗体的检测，用于猪伪狂犬的免疫筛查、辅助诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

化学发光免疫分析chemiluminescenceimmunoassay；CLIA

将化学发光系统与免疫反应相结合，用发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应

后，经过分离游离态的发光标记物，加入发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量

或定性检测。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CLIA：化学发光免疫分析（Chemiluminescenceimmunoassay）

PRV:猪伪狂犬病毒（PseudorabiesVirus）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

RLU：相对光单位发光值（RelativeLightUnit）

EDC：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（碳化二亚胺）[1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)

carbodiimidehydrochloride]

5技术原理

1

本文件采用磁微粒化学发光——竞争法原理，用猪伪狂犬病毒gB重组蛋白包被磁微粒，酶标单克

隆抗体与待检样品中的抗体竞争性的与包被抗原结合，通过抗原抗体反应，形成抗原-酶标抗体复合物、

抗原-待测抗体复合物；抗原-酶标抗体复合物催化发光底物液发出光子形成发光值（RLU），其发光强

度与猪伪狂犬病毒gB抗体的含量成反比。根据样本发光值与阴性对照发光值的比值，判断猪伪狂犬病

毒gB抗体水平，比值越大，说明样本中猪伪狂犬病毒gB抗体水平越低；比值越小，说明样本中猪伪狂

犬病毒gB抗体水平越高。

6试剂与耗材

6.1包被磁微粒混悬液，按照附录A制备。

6.2酶标单克隆抗体（辣根过氧化物酶标记的猪伪狂犬病毒gB单克隆抗体）。

6.3相关试剂的配制，按照附录B配制。

6.4全自动化学发光免疫分析仪。

6.5可调单道移液器（0.5～20µL、10～100µL、20～200µL、100～1000µL）。

6.6一次性采血器（5mL、10mL）。

6.7离心机（15000r/min）。

6.8顶入式搅拌器。

6.9恒温摇床。

7实验前准备

7.1样品采集及处理

按照NY/T541中规定进行样本的采集与处理，期间做好个人防护。按常规方法抽取2mL～3mL血

液置洁净干燥的试管中，静置约60min，待血液凝固后4000r/min离心10min（也可将血液样本静置约120

min，待血液凝固自然析出血清），分离血清。要求血清清亮，无溶血、无污染。

7.2血清样品的存放与运输

按照NY/T541中规定进行血清样本的存放与运输。血清样本若在一周内检测，置2℃～8℃条件下

保存。若超过一周检测，置于-20℃以下冷冻保存。运输时注意冷藏，确保样品清亮无污染。采集的血

清样本可用冰袋或保温桶加冰密封等方式运输。按照GB19489中的规定进行样品的生物安全标识。

8操作步骤

8.1样品准备

将待检样品从2℃～8℃或-20℃冰箱取出，静置至室温。

8.2仪器准备

2

参照磁微粒化学发光仪器系统操作说明，按设定的反应程序设置仪器参数，将分装有1×洗涤液、

酶结合物、发光底物A和发光底物B的试剂瓶分别插入仪器相应孔。开机自检，待仪器自检、管路清

洗1次、底物灌注完成后，可以进行样本检测。

8.3加样

在样本架上依次