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RGS1对RAW264.7细胞共刺激分子和细胞因
子表达的调节
【摘要】目的:研究RGS1基因对细胞表面分子表达以及细胞因
子分泌的影响。方法:通过克隆RGS1基因、转染RAW264.7细胞、建
立稳定转染的细胞系,利用流式细胞术检测,基因芯片分析初步探讨
RGS1基因的功能。结果:RGS1基因能够抑制NFκB转录因子活性;
RGS1基因明显增加RAW264.7细胞表面CD86分子的表达,降低CD80
表达;在不同Toll样受体配体刺激后,CD40、CD80和PD1水平低于
对照组。同时,RGS1基因使IL6、IL15的表达明显升高,IL
10、IL1的表达明显降低。结论:RGS1基因可调节免疫相关细
胞表面分子和细胞因子的分泌,影响Toll样受体信号通路,表明
RGS1可能在免疫调节方面起重要作用。
【关键词】免疫调节RGS1基因免疫相关细胞
免疫细胞表面刺激分子和由此产生的细胞因子在调节免疫反
应过程中起关键作用,对肿瘤免疫,移植排斥反应和自身免疫性疾病
的发生、发展、转归有着重要的影响。已经发现免细胞中有多种基
因表达的改变[1]。我们前期研究中发现卵巢肿瘤细胞能够导致抗原
提呈细胞RGS1上调,提示了RGS1可能在免疫调节过程中起作用。RGS1
(regulatorofGprotein)是GTPase激活蛋白,由许多成员组成。
这个家族的成员能在免疫细胞如T细胞、B细胞和树突细胞表达。有
研究表明,RGS1基因与趋化因子诱导的免疫细胞迁移有关,从而对免
疫功能进行调节[2]。我们通过建立RGS1基因稳定转染的RAW264.7
细胞系,观察其对细胞表面分子表达的影响和细胞因子分泌模式的改
变外,为RGS1在免疫相关疾病治疗的潜在应用提供实验依据。
1材料和方法
1.1材料RAW264.7细胞购自美国ATCC公司。NFκB荧
光素酶质粒和NFκB碱性磷酸酶(seap)质粒由美国约翰霍普金斯大
学免疫实验室赠与;鼠RGS1pcDNA3.1/V5质粒由本实验室构建;
pcDNA3.1/V5HisTOPOTAExpression试剂盒购自Invitrogen
公司;PCR缓冲液、dNTPs、Taq、AgaroseGelDNA纯化试剂盒购
自TaKaRa公司。LipofectaminTM2000,SuperScript.OneStepRT
PCRwithPlatinumTaq购自Invitrogen公司。RNATRIzol试
剂购自北京鼎国公司。GreatEscAPeTMSEAP购自Clontech公司。
TritonX100,羊抗鼠抗体为Sigma公司产品。Trypsin胰酶(Lot:
AMG16843)为HyClone公司产品。OPTIMEMI无血清培养基购
自Invitrogen公司。PRMI1640购自HyClone公司。类标准胎牛血清
购自兰州民海生物公司。G418硫酸盐,硫酸卡那霉素购自Amresco公
司。
1.2方法
1.2.1克隆RGS1基因测序并建立稳定转染的RAW264.7细胞
系按照Invitrogen公司提供步骤,从肿瘤相关树突状细胞扩增提取
RGS1基因片段并克隆到pcDNA3.1His/V5Topo载体,测序确定RGS1
基因。RPMI1640培养基加入100mL/L新生牛血清培养RAW2
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