RGS1对RAW264.7细胞共刺激分子和细胞因子表达的调节.pdf

RGS1对RAW264.7细胞共刺激分子和细胞因

子表达的调节

【摘要】目的:研究RGS1基因对细胞表面分子表达以及细胞因

子分泌的影响。方法:通过克隆RGS1基因、转染RAW264.7细胞、建

立稳定转染的细胞系,利用流式细胞术检测,基因芯片分析初步探讨

RGS1基因的功能。结果:RGS1基因能够抑制NFκB转录因子活性;

RGS1基因明显增加RAW264.7细胞表面CD86分子的表达,降低CD80

表达;在不同Toll样受体配体刺激后,CD40、CD80和PD1水平低于

对照组。同时,RGS1基因使IL6、IL15的表达明显升高,IL

10、IL1的表达明显降低。结论:RGS1基因可调节免疫相关细

胞表面分子和细胞因子的分泌,影响Toll样受体信号通路,表明

RGS1可能在免疫调节方面起重要作用。

【关键词】免疫调节RGS1基因免疫相关细胞

免疫细胞表面刺激分子和由此产生的细胞因子在调节免疫反

应过程中起关键作用,对肿瘤免疫,移植排斥反应和自身免疫性疾病

的发生、发展、转归有着重要的影响。已经发现免细胞中有多种基

因表达的改变［1］。我们前期研究中发现卵巢肿瘤细胞能够导致抗原

提呈细胞RGS1上调,提示了RGS1可能在免疫调节过程中起作用。RGS1

（regulatorofGprotein）是GTPase激活蛋白,由许多成员组成。

这个家族的成员能在免疫细胞如T细胞、B细胞和树突细胞表达。有

研究表明,RGS1基因与趋化因子诱导的免疫细胞迁移有关,从而对免

疫功能进行调节［2］。我们通过建立RGS1基因稳定转染的RAW264.7

细胞系,观察其对细胞表面分子表达的影响和细胞因子分泌模式的改

变外,为RGS1在免疫相关疾病治疗的潜在应用提供实验依据。

1材料和方法

1.1材料RAW264.7细胞购自美国ATCC公司。NFκB荧

光素酶质粒和NFκB碱性磷酸酶(seap)质粒由美国约翰霍普金斯大

学免疫实验室赠与;鼠RGS1pcDNA3.1/V5质粒由本实验室构建;

pcDNA3.1/V5HisTOPOTAExpression试剂盒购自Invitrogen

公司;PCR缓冲液、dNTPs、Taq、AgaroseGelDNA纯化试剂盒购

自TaKaRa公司。LipofectaminTM2000,SuperScript.OneStepRT

PCRwithPlatinumTaq购自Invitrogen公司。RNATRIzol试

剂购自北京鼎国公司。GreatEscAPeTMSEAP购自Clontech公司。

TritonX100,羊抗鼠抗体为Sigma公司产品。Trypsin胰酶（Lot:

AMG16843）为HyClone公司产品。OPTIMEMI无血清培养基购

自Invitrogen公司。PRMI1640购自HyClone公司。类标准胎牛血清

购自兰州民海生物公司。G418硫酸盐,硫酸卡那霉素购自Amresco公

司。

1.2方法

1.2.1克隆RGS1基因测序并建立稳定转染的RAW264.7细胞

系按照Invitrogen公司提供步骤,从肿瘤相关树突状细胞扩增提取

RGS1基因片段并克隆到pcDNA3.1His/V5Topo载体,测序确定RGS1

基因。RPMI1640培养基加入100mL/L新生牛血清培养RAW2