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分子量(还原型SDS-PAGE)测定标准操作规程.pdf

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细胞因子分子量(还原型SDS)测定标准操作规程

依据:《中华人民共和国药典》2005年版第三部。

范围:适用于细胞因子蛋白质分子量测定。

目的:测定待检品分子量是否符合《中华人民共和国药典》2005年版要求

原理:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺在催化剂的

作用下聚合成大分子凝胶后再进行电泳。因此它兼具了分子筛效应与电泳效应。其

催化系统为过硫酸铵-TEMED系统。而SDS这种阴离子表面活性剂的加入,它能使蛋

白质氢键、疏水键打开,并按一定比例与蛋白质分子结合成带负电的复合物,其负

电荷远远超过了蛋白质原有的电荷,因而掩盖了不同种类的蛋白质间原有的电荷差

别。这样就使电泳的迁移率只取决于分子量大小这一因素,从而达到分离不同组分

的蛋白质的目的,并在还原剂巯基乙醇的存在下,(定量的巯基乙醇可以使蛋白质分

子内的二硫键彻底还原;以使SDS定量的结合到蛋白质分子上去,使蛋白质具有相

同的构象),可以检测到是否有蛋白质聚合体的产生。

内容:

1材料

1.1样品:经二人复核批号无误后检测

1.2试剂

甲醇CHOH分析纯

3

无水乙醇CHOH分析纯

25

浓盐酸HCl分析纯

甘油CHO分析纯

383

硝酸银AgNO分析纯

3

重铬酸钾KCrO分析纯

227

正丁醇CHOH分析纯

49

甲醛HCHO分析纯

丙烯酰胺CHCHCONH分析纯

22

甲叉双丙烯酰胺[(CHCHCONH)]CH分析纯

2222

过硫酸铵(NH)SO分析纯

4228

TEMED(四甲基乙二胺)(CH)N(CH)N(CH)分析纯

322232

甘氨酸CHNO分析纯

252

SDS(十二烷基硫酸钠)CHOSNa分析纯

12254

乙酸CHCOOH分析纯

3

碳酸钠NaCO分析纯

23

β-巯基乙醇HSCH

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