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细胞因子分子量(还原型SDS)测定标准操作规程
依据:《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围:适用于细胞因子蛋白质分子量测定。
目的:测定待检品分子量是否符合《中华人民共和国药典》2005年版要求
原理:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺在催化剂的
作用下聚合成大分子凝胶后再进行电泳。因此它兼具了分子筛效应与电泳效应。其
催化系统为过硫酸铵-TEMED系统。而SDS这种阴离子表面活性剂的加入,它能使蛋
白质氢键、疏水键打开,并按一定比例与蛋白质分子结合成带负电的复合物,其负
电荷远远超过了蛋白质原有的电荷,因而掩盖了不同种类的蛋白质间原有的电荷差
别。这样就使电泳的迁移率只取决于分子量大小这一因素,从而达到分离不同组分
的蛋白质的目的,并在还原剂巯基乙醇的存在下,(定量的巯基乙醇可以使蛋白质分
子内的二硫键彻底还原;以使SDS定量的结合到蛋白质分子上去,使蛋白质具有相
同的构象),可以检测到是否有蛋白质聚合体的产生。
内容:
1材料
1.1样品:经二人复核批号无误后检测
1.2试剂
甲醇CHOH分析纯
3
无水乙醇CHOH分析纯
25
浓盐酸HCl分析纯
甘油CHO分析纯
383
硝酸银AgNO分析纯
3
重铬酸钾KCrO分析纯
227
正丁醇CHOH分析纯
49
甲醛HCHO分析纯
丙烯酰胺CHCHCONH分析纯
22
甲叉双丙烯酰胺[(CHCHCONH)]CH分析纯
2222
过硫酸铵(NH)SO分析纯
4228
TEMED(四甲基乙二胺)(CH)N(CH)N(CH)分析纯
322232
甘氨酸CHNO分析纯
252
SDS(十二烷基硫酸钠)CHOSNa分析纯
12254
乙酸CHCOOH分析纯
3
碳酸钠NaCO分析纯
23
β-巯基乙醇HSCH
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