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蛋白质组学思考题答案

1.蛋白质组学概念？

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，从蛋白质整体水平上来认

识生命活动规律的科学。

2.蛋白质分离纯化的基本原则？

（1）获得尽可能多的样品蛋白

（2）不同的制备方法配合使用

（3）制备的方法与后续研究相结合

3.细胞破碎的方法有哪些？

（1）温和裂解方法：冻融，渗透，去污剂，酶消化法，匀浆法

（2）强烈裂解方法：超声波，玻璃珠，研磨法

4.蛋白质裂解液使用还原剂、去污剂及变性剂的作用分别是什么，

熟悉经常用到的试剂？

（1）去污剂：有助于溶解膜蛋白质，并有助于膜蛋白质与脂类的

分离。常用的有离子型去污剂（SDS），非离子型去污剂（TritonX-

100），两性离子去污剂(CHAPS)。

（2）变性剂：通过改变溶液中的氢键结构使蛋白质充分伸展，将

其疏水中心完全暴露，降低接近疏水残基的能量域。常用的有尿素和

硫脲。

（3）还原剂：用于还原二硫键或防止蛋白质氧化，增加蛋白质的

溶解性。常用的有具游离巯基的β－巯基乙醇（β－ME），二硫苏糖

醇（DTT）和不带电荷的三丁基膦（TBP）。

5.蛋白质裂解液中加入两性电解质的作用是什么？

（1）起载体作用

（2）捕获样品中的少量盐分，从而保证蛋白质的溶解性

6.影响样品制备的干扰物质有哪些？

（1）盐（NaCl）

（2）离子去污剂（SDS）

（3）核酸、脂类及多聚糖

（4）酚类复合物

（5）不溶物质

7.实验时去除植物材料中酚类物质的方法是什么？

（1）还原状态：通过氢键与蛋白结合；处理方法：添加PVPP，

形成多酚物（2）氧化状态（醌）：发生共价结合；处理方法：添加还

原剂(DTT,抗坏血酸,亚硫酸盐)

8.凝胶的分子筛效应？

凝胶分离不同分子量大小的分子的特性称为分子筛效应。

9.双向电泳第一向进行胶条水化时的两种方式是什么？各有什么

特点？

（1）主动水化：低电压可以让高分子量的蛋白更好地进入胶条

（2）被动水化：蛋白自然地进入胶条；用于高盐浓度的蛋白样品；

水化后,在电极处使用滤纸片除盐，如果在水化前使用滤纸片会导致蛋

白被吸附在滤纸片上10.双向凝胶电泳的基本原理？

2D-SDS是两种分离方法的结合

（1）根据等电点用IEF分离蛋白质

（2）在聚丙烯酰胺凝胶上电泳进一步分离聚焦的蛋白质根据等电

点的不同，第二向电泳根据分子质量的不同分离蛋白质

11.双向凝胶电泳的基本流程？

(1)等电聚焦：标记胶条→样品上样及水化→置于聚焦盘内→设定

IEF电泳程序→加矿物油覆盖胶面

(2)胶条平衡：先在含有SDS、还原剂DTT但不含碘乙酰胺的平衡

液中平衡，再在含碘乙酰胺的平衡液中平衡

(3)SDS：制胶→样品制备→加缓冲液→连接电源→电泳

(4)染色：染色液及脱色液的配制→染色→脱色

12.双向电泳中第一向到第二向进行平衡过程的机理？

平衡buffer1：还原(将S–S键转化为SH)，DTT

平衡buffer2：烷基化物(使每个SH均烷基化以防止S–S键的重

新形成),碘乙酰胺

13.蛋白凝胶染色的方法有哪些？各有哪些优缺点？

（1）考马斯亮蓝法

优点：选择性地对蛋白质进行染色，大大地降低了化学噪音，提

高了灵敏度（2）胶体考染法

优点：考马斯亮蓝定量地与蛋白质结合，可以准确定量蛋白质；

缺点：蛋白质谷氨酸羧基侧链不可逆的酯基化（酸催化下），使

得肽谱数据失真（3）银染法

优点：大大提高了灵敏度；扩展了动态线性范围兼容质谱（去除

戊二醛后）；快速，方便

缺点：银离子可与半胱氨酸残基结合；银染试剂戊二醛和甲醛都

会对蛋白质的α-和ε-氨基烷基化，妨碍后续分析

（4）SYPRO染料

优点：快速，灵敏，终点式染色易操作；动态线性范围广，染色

覆盖范围广；不干扰后续分析。

14.正相和反相液相色谱的区