WB操作原理以及流程细节.docx

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2024-07-10 发布于天津
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WB试验的根本原理及操作流程

【试验原理】

一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延长称为Western(西)印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳区分出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶上区分出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并与第一抗体共孵。第一抗体专一地与待分别蛋自质的抗原打算簇结合，然后用另一种蛋自质，如135I-蛋白A或辣根过氧化物酶连接的山羊抗IgG检测已结合上去的抗体。本法