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医疗机构临床基因扩增检验实
验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一,临床基因扩增检验实验室的设计
(一)临床基因扩增检验实验室区域设计规划。
原则上临床基因扩增实验室应当设置以下区域:
试剂储存和准备区,标本制备区,扩增区,扩增
产物分析区。这四个区域在物理空间上必须是完
全相互独立的,各区域无论是在空间上还是在使
用中,应当始终处于完全的分割状态,不能有空
气的直接相通。根据使用仪器的功能,区域可适
当合并。例如使用实时荧光PCR仪,扩增区,
扩增产物分析区可合并;采用标本处理,核酸提
取及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制
备区,扩增区,扩增产物分析区可合并。各区的
功能是:
1,试剂储存和准备区:贮存试剂的制备,
试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心
管,吸头等消耗品的贮存和准备。
2,标本制备区:核酸(RNA,DNA)提取,
贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床标本
操作,应符合生物安全二级实验室防护设备,个
人防护和操作规范的要求。
2,标本制备区。
(1)2~8冰箱,-20℃或-80℃冰箱。
(2)高速离心机。
(3)混匀器。
(4)水浴箱或加热模块。
(5)微量加样器(覆盖0.2~1000ul)。
(6)可移动紫外灯(近工作台面)。
(7)生物安全柜。
(8)消耗品:一次性手套,耐高温处理的离
心管和加样器吸头(带滤芯)。
(9)专用工作服和工作鞋(套)。
(10)专用办公用品。
(11)如需处理大分子DNA,应当具有超声
波水浴仪。
3,扩增区。
(1)核酸扩增仪。
(2)微量加样器(覆盖0.2~1000ul),(视情
况定)。
(3)可移动紫外灯(近工作台面)。
(4)消耗品:一次性手套,耐高温处理的离
心管和加样器吸头(带滤芯)。
(5)专用工作服和工作鞋(套)。
(6)专用办公用品。
4,扩增产物分析区。
(1)微量加样器(覆盖0.2~1000ul)。
(2)可移动紫外灯(近工作台面)。
(3)消耗品:一次性手套,耐高温处理的离
心管和加样器吸头(带滤芯)。
(4)专用工作服和工作鞋(套)。
(5)专用办公用品。
上述各区域仪器设备配备为基本配备,实验室
应当根据自己使用的扩增检测技术或试剂的特
点,对仪器设备进行必要的增减。
二,临床基因扩增检验实验室工作基本原则
(一)进入各工作区域应当严格按照单一方向
进行,即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增
区→扩增产物分析区。
(二)各工作区域必须有明确的标记,不同工
作区域内的设备,物品不得混用。
(三)不同的工作区域使用不同的工作服(例
如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,
不得将工作服带出。
(四)实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区
→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方
向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用
具以防止交叉污染。
(五)工作结束后,必须立即对工作区域进行
清洁。工作区的实验台面应当可耐受诸如次氯酸
钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台面的紫外
照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量
对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫
外灯(254nm波长),在工作完成后调至实验台
上60~90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几
十碱基对(bp),对紫外线伤害不敏感,因此紫
外照射扩增片段必须延长照射时间,最好是照射
过夜。
(六)实验室的安全工作制度或安全标准操作
程序,所有操作符合《实验室生物安全通用要求》
(GB19489-2008)。
三,临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项
(一)试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标
本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮
存和准备区,不能经过扩增检测区,试剂盒中的
阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应当保
存在标本处理区。
(二)标本制备区。由于在样本混匀,核酸纯
化过程中可能会发生气溶胶所致的污染,可通过
在本区内设立正压条件,避免从临近区进入本区
的气溶胶污染。为
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