小麦矮腥黑粉菌检测的一种PCR方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1891835A

(43)申请公布日2007.01.10

(21)申请号CN200510080073.7

(22)申请日2005.06.29

(71)申请人中国农业科学院植物保护研究所

地址100094北京市海淀区圆明园西路2号

(72)发明人陈万权刘太国刘建华

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

C12Q1/68

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

小麦矮腥黑粉菌检测的一种PCR方

法

(57)摘要

本发明为“小麦矮腥黑粉菌检测的

一种PCR方法”，属生物技术和植物检疫

领域。本发明涉及的小麦矮腥黑粉菌检测

的一种PCR方法，其特征是该方法应用

PCR技术快速检测小麦种子带有的矮腥黑

粉菌及感病植株的早期诊断，提高了灵敏

度和准确性并且快速。还涉及PCR引物序

列及检测试剂盒。本发明在小麦矮腥黑穗

病种子带菌及早期诊断方面，具有很高的

应用价值。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.包括小麦矮腥黑粉菌特异性检测引物一对，PrimerT1/T2，其序列为：

PrimerT1：5′-CTCCGACGACGAAGTATAGCG-3′

PrimerT2：5′-GGTATACGCGGCACCATATGC-3′

其中PrimerT1/T2引物对在小麦矮腥黑粉菌中特异性扩增出367bp的产物。

2.权利要求1所述小麦矮腥黑粉菌特异性检测的用法，包括：

检测试剂盒反应体系：

1mL检测溶液包括：50mmol.Lsup-1/supTris.Cl、125mmol.Lsup-1/supKCl、

2.5mmol.Lsup-1/supMgClsub2/sub、10mMdNTPs、PrimerT2/T2各

0.25mmol/mL、0.1mg.mLsup-1/supBSA、TaqDNA聚合酶100单位。

PCR扩增采用25μL反应体系：取1μLDNA溶液(含有10ng以上DNA)，加入

10μL试剂盒溶液和14μL灭菌超纯水，总体积25μL；

PCR扩增程序为：94℃变性2分钟；进入循环，94℃变性30秒，58℃退火30秒，

72℃延伸120秒，35个循环；最后72℃延伸5分钟。

说明书

本发明的技术领域：

本发明小麦矮腥黑粉菌检测的一种PCR方法，属于生物技术领域。专用于海关进

出境小麦所带小麦矮腥黑粉菌的高灵敏度快速检测，同时可用于田间小麦矮腥黑粉

病的早期诊断及检测。

本发明的研究背景：

小麦世界最重要的粮食作物之一，也是我国的第二大粮食作物。小麦矮腥黑粉菌引

起的小麦矮腥黑穗病是我国的一类危险性病害，1935年Young首次正式确认小麦

矮腥黑穗病不同于小麦普通腥黑穗病。调查结果表明，小麦矮腥黑穗病在土耳其、

伊朗和伊拉克等国也均有发生，目前小麦矮腥黑穗病的分布已遍及欧洲、西亚、北

非和北美等地。土耳其的安纳托利亚东部和海拔高度在1300～2000米的伊朗西北

部均被列入最严重的发病地区之一；美国西北部的爱达荷、犹他、俄勒冈、华盛顿、

蒙大拿、科罗拉多、怀俄明等7个州和大湖区的密执安、印第安那、纽约等3个州

的小麦主产区，也是小麦矮腥黑穗病的常发区。除了危害Triticumspp.外，

T.controversa也发生在许多禾本科植物上，包括Aegilops，Agropyron，Agrostus，

Alopecurus，Arrhenatherum，Beckmannia，Bromus，Dactylis，Elyaus，Festuca，

Holcus，Hordeum，K