巴西坚果过敏原的恒温扩增检测引物、试剂盒及方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN104630331A

(43)申请公布日2015.05.20

(21)申请号CN201310563741.6

(22)申请日2013.11.14

(71)申请人广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心

地址510630广东省广州市天河区珠江新城花城大道66号国检大厦

(72)发明人刘津李建军李婷李志勇刘青何日荣关丽军席静

(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司

代理人郑莹

(51)Int.CI

C12Q1/68

C12N15/11

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

巴西坚果过敏原的恒温扩增检测引

物、试剂盒及方法

(57)摘要

本发明公开了一种巴西坚果过敏原

的恒温扩增检测引物、试剂盒及方法。本

发明方法基于环介导等温扩增技术，根据

巴西坚果2S蛋白的编码基因序列设计6条

特异性引物，在具有链置换活性的

Bst2.0WarmStarDNA聚合酶作用下，在

63～65℃对核酸扩增45～60min，扩增效

率可以达到10

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种巴西坚果过敏原的恒温扩增检测方法，包括以下步骤：

1）根据巴西坚果2S蛋白的编码基因设计特异性恒温扩增检测引物；

2）待检样品DNA在上述引物、iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶存在的条件下

进行恒温扩增反应；

3）根据扩增结果判断待检样品中是否存在巴西坚果过敏原成分。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述恒温扩增检测引物的序列分

别如下所示：

外引物1：CATGAGACAGCAGGTTAGTTAT（SEQIDNo：1）；

外引物2：ATCTCATGGGACTGAGGTT（SEQIDNo：2）；

内引物1：CTCATATGCGGCTCCATTCCCATGCGAAATGAACCCTGG

（SEQIDNo：3）；

内引物2：AGAGCTGCAGATGCGAAGGGGTTGCATCTCCTTCTGTT

（SEQIDNo：4）；

环引物1：CTGGGCATGGTCTGGTAC（SEQIDNo：5）；

环引物2：AGGATGATGATGAGGATGATGC（SEQIDNo：6）。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤2）所述恒温扩增反应

的体系为：25μL反应体系中含有外引物1和外引物2各2～10μM、内引物1和内

引物2各20～60μM、环引物1和环引物2各5～20μM、

iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶5～10U、pH8.8的Tris-HCl20mM、KCl8～

12mM、(NH4)sub2/subSOsub4/sub8～12mM、0.08～0.12%Tween-20、

dNTPs1.5～1.7mM、MgSOsub4/sub0.6～1.0mM、甜菜碱0.7～0.9M，待检样

品DNA2μL。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤2）所述恒温扩增反应的体

系为：25μL反应体系中含有外引物1和外引物2各5μM、内引物1和内引物2各

40μM、环引物1和环引物2各20μM、iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶8U、

pH8.8的Tris-HCl20mM、KCl10mM、

(NH4)sub2/subSOsub4/sub10mM、0.1%Tween-20、dNTPs1.6mM、

MgSOsub4/