一种HPA等位基因分型检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101845520A

(43)申请公布日2010.09.29

(21)申请号CN201010170627.3

(22)申请日2010.05.11

(71)申请人上海市血液中心

地址200051上海市长宁区虹桥路1191号

(72)发明人冯明亮沈彤刘达庄赵玉林刘熔增

(74)专利代理机构上海光华专利事务所

代理人许亦琳

(51)Int.CI

C12Q1/70

C12Q1/68

G01N21/64

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种HPA等位基因分型检测试剂

盒

(57)摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉

及一种HPA等位基因分型检测试剂盒。本

发明的试剂盒中含有引物和MGB-探针，

该试剂盒可以根据扩增后观察两种荧光曲

线的不同和散点图的分布，判断等位基因

基因型，从而完成HPA等位基因分型检

测。本发明的试剂盒能够满足高通量的实

验需求，在拥有合适DNA检材的情况下，

在2小时内即可完成整个分型实验，解决

了对中国人群HPA-1～5、15进行系统性

快速分型的问题，同时能够鉴别出纯杂合

子情况，直接得出分型结果，具有灵敏、

稳定、准确、高效的特点。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种HPA等位基因分型检测试剂盒，该试剂盒包括引物1-12和MGB-Taqman探

针1-12，其中，引物1-12的序列依次分别为SEQIDNO：1-12所示，MGB-

Taqman探针1-12的序列依次分别为SEQIDNO：13-24所示。

2.如权利要求1所述的HPA等位基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述MGB-

Taqman探针的两端均设有荧光报告基团和淬灭基团。

3.如权利要求2所述的HPA等位基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述荧光报

告基团选自FAM或VIC，所述荧光淬灭基因为TAMRA。

4.如权利要求3所述的HPA等位基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述MGB-

Taqman探针1、3、5、7、9和11的5′端设有荧光报告基团FAM；所述MGB-

Taqman探针2、4、6、8、10和12的5′端设有荧光报告基团VIC。

5.如权利要求1-4中任一权利要求所述的HPA等位基因分型检测试剂盒，其特征在

于，所述试剂盒还包括阳性对照及阴性对照。

6.如权利要求5中所述的HPA等位基因分型检测试剂盒，其特征在于，所述阳性

对照品包括阳性纯合对照品1、阳性纯合对照品2和阳性杂合对照品；且所述阳性

纯合对照品1为含有6对HPA抗原系统等位基因a的纯合子的DNA的样品，所述

阳性纯合对照品2为含有6对HPA抗原系统等位基因b的纯合子的DNA的样品，

所述阳性杂合对照含有6对HPA抗原系统等位基因a和等位基因b的杂合子的

DNA的样品。

7.如权利要求1-6中任一权利要求所述HPA等位基因分型检测试剂盒的使用方法，

包括下列步骤：

a)以样本DNA作为模板，采用试剂盒中的引物及MGB-Taqman探针进行实时荧光

定量PCR反应后进行检测；

b)根据实时荧光定量PCR检测结果，根据PCR检测结果来判断样本DNA中HPA

等位基因的类型。

8.如权利要求7所述的HPA等位基因分型检测试剂盒的使用方法，其特征在于，

所述步骤1)中的实时荧光定量PCR反应的反应条件为60℃30sec，95℃10min，而

后92℃15sec与60℃1min交替进行40个循环，在60℃时进行荧光检测。