一种检验葡萄糖氧化杆菌催化能力的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101493447A

(43)申请公布日2009.07.29

(21)申请号CN200810188537.X

(22)申请日2008.12.19

(71)申请人鲁南制药集团股份有限公司

地址276005山东省临沂市红旗路209号

(72)发明人赵志全

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

G01N30/90

C12Q1/02

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种检验葡萄糖氧化杆菌催化能力

的方法

(57)摘要

本发明属于微生物工程领域，具体

涉及生产米格列醇过程中检验葡萄糖氧化

杆菌催化能力的检测方法，包括摇瓶生物

转化过程、硅胶板层析和显色过程。本发

明操作简单、易行，对生产、研究很有意

义。既可以用于出发菌株的催化能力检

测，优选菌株，又可用于发酵结束菌丝体

的催化能力的检验，指导生产，极有应用

价值。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种检验葡萄糖氧化杆菌催化能力的方法，包括如下步骤：

1)将N-(2-羟乙基)-葡糖胺用纯化水溶解，加入葡萄糖氧化杆菌的菌丝体，放入恒温

振荡培养箱中转化；

2)将转化液离心，取上清液点样硅胶板，以甲醇-乙醇-氨水为层析液进行层析，然

后干燥硅胶板进行显色。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中N-(2-羟乙基)-葡糖胺在水

中的重量百分比浓度为2％～8％，pH为4.5～6.5。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中菌丝体与N-(2-羟乙基)-葡

糖胺的重量比为1～5∶1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中转化的条件为：恒温振荡

培养箱的转速为250rpm，温度为20℃，转化15小时。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中甲醇-乙醇-氨水的体积比

为1～3∶1～3∶1～3。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中氨水的浓度为25～28％。

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程领域，具体涉及生产米格列醇过程中检验葡萄糖氧化杆菌催

化能力的检测方法。

背景技术

米格列醇(miglitol)是拜耳公司在1997年度上市的新型抗糖尿病药物。它是从杆菌

肉汤培养基中发现的一种新型肠道α-葡萄糖苷酶抑制剂，是1-脱氧野尻霉素的母

体修饰产物，属于N-取代-1-脱氧野尻霉素类型，结构与葡萄糖相似。尽管用化学

合成的方法能够制备米格列醇，但化学合成法制备米格列醇的步骤较多，米格列醇

分子中含有的四个手性中心也给化学合成带来了很大的困难。目前生产规模大多采

用生物合成来制备米格列醇。米格列醇的生物合成法据文献报道大致有二条路线：

一是先由野尻霉素或1-脱氧野尻霉素产生菌生物发酵，制备获得野尻霉素或1-脱

氧野尻霉素，然后再经过化学合成方法获得米格列醇，这是最原始的途径；二是应

用氧化葡糖酸菌转化制备米格列醇关键中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素，其主要通

过化学合成-生物转化-化学合成的方法来制备。

US4266025，EP0477160，USP2001/0019837公布了另外的米格列醇的生产方法，

即化学合成结合生物催化的方法。但由于菌体活力不高，导致生物催化时间过长，

造成生产成本高，生产周期长，给工业化生产带来很大的障碍。

由于微生物酶的高效专一性，省略了化学合成过程中为达到专一地改造某个目的基

团必须进行的加入和脱除保护基团的步骤，大大简化了制备过程，提高了反应收率。

氧化葡糖酸杆菌用于转化特定底物制备1-脱氧野尻霉素及其衍生物具有很多优点：

1)转化液经离心除去菌体，无需分离纯化出中间体