一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101475929A

(43)申请公布日2009.07.08

(21)申请号CN200910071296.5

(22)申请日2009.01.19

(71)申请人东北林业大学;詹亚光

地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号

(72)发明人詹亚光范桂枝尹静王博由香玲齐凤慧曾凡锁

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

C12N5/04

C12P7/40

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果

酸的方法

(57)摘要

一种利用白桦悬浮培养生产齐墩果

酸的方法。该方法是以白桦成树一年生枝

休眠芽、展叶芽和种子为材料，接种于

WPM+6－BA1mg/L培养基中获得白桦无

菌苗，再以无菌苗茎段和叶片为外植体，

在培养基IS上诱导获得稳定、快速生长的

愈伤组织，最后在B5培养基，激素为

0.1～0.4mg/L6－BA和0.01～0.1mg/LTDZ

的培养基中进行悬浮细胞系的培养，蔗糖

为20g/L，pH值为6.0～6.5，接种量鲜重

为30～50g/L。23～25℃，110～130转

/min，光照8～10h/d，光照强度1400～

1700Lx，15天继代1次，多次继代培养后

获得稳定的白桦悬浮培养细胞系。经高效

液相色谱法检测，获得的白桦恳浮培养细

胞中齐墩果酸含量可达到0.217～

0.714mg/g(干重)。本发明是第一次在白桦

植物中通过细胞工程方法生产齐墩果酸，

此方法周期短，成本低，能节省大量人

力、物力、提高劳动生产率，为解决天然

植物药物来源紧缺和工业化大规模生产齐

墩果酸药物提供了一种新途径。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、一种通过白桦悬浮培养生产齐墩果酸的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)通过常规方法培养获得白桦愈伤组织；2)将愈伤组织在B5悬浮培养基上培养。

pH6.5，250mL三角瓶，装100mL培养基，121℃高压蒸汽灭菌

20min。旋转摇床中震荡培养，每个悬浮培养继代周期后，培养

物过筛，将单细胞和小细胞团，分装在含新鲜液体培养基的培养瓶中继续培

养获得悬浮细胞系；3)高效液相法检测齐墩果酸含量。

2、根据权利要求书1所述的方法，其特征在于接种量为3g～5g/100mL，转速

120rpm/min，培养温度为24～26℃，光照强度1000～1500Lx，

光/暗周期为16h/8h，湿度60％～70％。

3、根据权利要求书1所述的方法，其特征在于添加的激素为0.1～0.4mg/L6-BA和

0.01～0.1mg/LTDZ。

4、根据权利要求书1所述的方法，其特征在于悬浮细胞系接种后15天收获。

5、根据权利要求书1所述的方法，其特征在于悬浮细胞系多次继代后，平均细胞

增殖仍达到4～8倍，齐墩果酸含量可达到0.217～0.714mg/g(干

重)。

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种由悬浮法培养白桦而生产齐墩果酸的方法。

背景技术

早在《本草纲目》中有记载，桦树皮可用于黄疸、乳痛、疥疮等疾病的治疗。在民

间桦树皮还用于治疗慢性痢疾及清热解毒、止咳、平喘等。随着研究发现，

桦树皮的主要药用成分是次生代谢类三萜物质，