细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术.pptx

细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第1页

2第一个别

细菌培养基制备、灭菌目标要求试验材料试验程序细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第2页

3目要求熟悉玻璃器皿洗涤和灭菌前准备。掌握培养基和无菌水制备方法。掌握高压蒸气灭菌技术。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第3页

4实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻璃珠等。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第4页

5实验程序玻璃器皿洗涤和包装培养基制备无菌稀释水制备培养基和玻璃器材等灭菌细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第5页

6试验程序1（玻璃器皿洗涤和包装）清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。棉塞制作包装培养皿和移液管等。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第6页

7实验程序2（培养基种类）据组成成份可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定百分比配制而成。2.半合成培养基：有一个别纯化学物质和另一个别天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然起源有机物配制而成。从培养基物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右琼脂。3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右琼脂。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第7页

8实验程序2（培养基种类）常见凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第8页

9实验程序2

（培养基配制方法和步骤）1.取一个300mL烧杯，装150mL蒸馏水。2.按配方逐一正确称取各种成份，依次加入水中溶解。注意：a.前一个成份溶解之后，才能加入下一个成份b.可加热促进各成份溶解c.加热过程应不停搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失水量。培养基配方牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水pH数量0.75g1.5g0.75g3g150mL7.6细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第9页

10实验程序2

（培养基配制方法和步骤）3.调pH值：用10％NaOH调pH至7.6，用精密pH试纸对照。4.分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意不要污染棉塞和瓶口。5.包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。6.灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第10页

11实验程序2（培养基分装和斜面培养基制作）☆每支试管装量为试管高度1/4～1/3.☆斜面长度为试管长度1/3～1/2.细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第11页

12试验程序2（培养基配制方法和步骤）细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第12页

13试验程序3（无菌稀释水制备）取一个250mL锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。另取5支18mm×180mm试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。无菌稀释水为微生物分离试验中所需要材料。细菌培养基的制备灭菌及接种和培养技术第13页

14试验程序4（培养基和玻璃器材等灭菌）加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器干热灭菌操作方法a.将待灭菌物品放入恒温箱，将温度调整至160℃并维持2h；b.把恒温箱调整旋钮调回零处，待温度降到50℃左右，