荧光原位杂技技术和其临床应用.pptx

荧光原位杂交技术及其临床应用荧光原位杂交（FISH）将分子带进细胞遗传学领域荧光原位杂技技术和其临床应用1/50

荧光原位杂交技术90年代以后,伴随分子生物学技术提升以及向各学科渗透,出现了一个新利用分子伎俩分析染色体异常方法,即:染色体荧光原位杂交(FISH)技术,该技术不但可用于中期分裂相,还可在间期细胞显示杂交信号,尤其适合用于那些培养难以成功各种组织细胞。荧光原位杂技技术和其临床应用2/50

由细胞到DNA分子荧光原位杂技技术和其临床应用3/50

荧光原位杂交技术基本概念

1.脱氧核糖核酸(DNA)分子2.脱氧核糖核酸(DNA)探针3.脱氧核糖核酸(DNA)变性4.脱氧核糖核酸(DNA)杂交荧光原位杂技技术和其临床应用4/50

荧光原位杂交原理FISH基本原理是用已知标识单链核酸为探针，按照碱基互补标准，与待检材料中未知单链核酸进行特异性结合，形成可被检测杂交双链核酸。荧光原位杂技技术和其临床应用5/50

荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术（简称FISH）是用细胞遗传学和分子生物学原理，经过荧光标识核酸探针与细胞内核酸序列杂交。借助荧光显微镜，在细胞和（或）组织中观察并分析细胞内杂交于靶序列各种彩色探针信号，以取得细胞内多条染色体或各种基因状态信息。荧光原位杂技技术和其临床应用6/50

荧光原位杂交示意图荧光原位杂技技术和其临床应用7/50

常见荧色物荧色物激发（nm）散发（nm）DAPI达比350470FITC异氰酸荧光素490525TexasRed德克莎斯红颜料596615荧光原位杂技技术和其临床应用8/50

荧光显微镜系统荧光原位杂技技术和其临床应用9/50

探针标识种类及比较1.探针标识方法主要有两类：（1）直接标识法，就是荧光素经过一些方法直接连接到核酸序列上。（2）间接标识法，就是把地高辛或生物素等半抗原连接到核酸序列，然后在杂交过后检测阶段，加入标识有荧光素对应半抗原抗体参加反应进行检测。荧光原位杂技技术和其临床应用10/50

探针标识种类及比较2.这两种标识方法相比较而言各有利弊。直接法方便、快捷且背景低，信号强度不及间接法强；间接法含有信号放大系统，信号强检测灵敏度高，不过间接法杂交过后检测步骤繁琐，背景信号强。近年来荧光亮度和抗淬灭性不停改进和提升,直接标识荧光探针越来越成为首选,并采取各种不一样颜色荧光,方便在同一标本上同时检测各种异常.其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察,操作过程中也不需要严格避光,鉴于直接标识法已经能够取得较满意信号，当前临床检测用探针多为直接标识法标识。荧光原位杂技技术和其临床应用11/50

临床惯用探针临床使用探针都是以DNA为主。惯用探针主要有：（1）着丝粒探针。CEP:ChromosomeEnumerationDNAProbes（2）位点特异型探针。LSI:Locusspecificidentifier（3）染色体涂染探针。WCP:WholeChromosomePaints荧光原位杂技技术和其临床应用12/50

着丝粒探针a.高度重复序列DNA,重复数百次至数千次，其靶序列通常是在染色体p11-q11区域及异染色质区域。

b.特点：信号强

c.应用(a)标识染色体识别。

(b)染色体数目异常检测。

(c)间期细胞遗传学研究和临床诊疗。

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着丝粒探针染色体着丝粒异染色质域荧光原位杂技技术和其临床应用14/50

位点特异型探针a.标识了荧光信号DNA片段代表了某一个或几个基因位点全部序列。主要用以染色体DNA克隆序列定位和靶DNA序列拷贝数及结构改变检测。b.特点：信号较小。c.应用:

（a）定位DNA片段。

（b）确定染色体微小缺失与重复。

（c）间期细胞染色体数目异常诊疗。荧光原位杂技技术和其临床应用15/50

16号和22号染色体探针信号位点特异型探针荧光原位杂技技术和其临床应用16/50

染色体涂染探针a.涂染探针是针对某一整条染色体设计探针，涂染探针主要用于常规显带技术无法确定染色体重排和标识染色体确实定。能对整条染色体进行荧光标识b.特点：结果轻易判读。然而，